Inovace tohoto předmětu je spolufinancována Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky
Testy ekotoxicity s rybami
Testy toxicity na rybích modelech
Akutní testy toxicity
Prolongované testy toxicity
Chronické testy toxicity
Testy toxicity na rybích embryích a potěru
Embryonální testy
Embryolarvální testy
Testy ovlivnění růstu na nedospělých rybách
Testy bioakumulace
Chemické látky a chemické přípravky –
hodnocení vlastností nebezpečných
pro životní prostředí
• Zák. č. 356/2003 Sb. O chemických látkách a chemických přípravcích
• Metody pro zkoušení vlastností látek a přípravků uvedeny v části I. přílohy
č.2 Vyhlášky MŽP č. 222/2004 Sb., kterou s u chemických látek a přípravků
stanoví základní metody pro zkoušení fyzikálně-chemických vlastností,
výbušných vlastností a vlastností nebezpečných pro životní prostředí
• - akutní toxicita pro ryby
• - bioakumulace – průtoková zkouška na rybách
• - růstu na nedospělých rybách
• - toxicity na rybích embryích a potěru – krátkodobá zkouška
Akutní testy
ČSN EN ISO 7346-1 (75 7761) Jakost vod – Stanovení akutní letální toxicity
látek pro sladkovodní ryby Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei,
Cyprinidae) – Část 1: Statická metoda
ČSN EN ISO 7346-2 (75 7761) Jakost vod – Stanovení akutní letální toxicity
látek pro sladkovodní ryby Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei,
Cyprinidae) – Část 2: Obnovovací metoda
ČSN EN ISO 7346-3 (75 7761) Jakost vod – Stanovení akutní letální toxicity
látek pro sladkovodní ryby Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei,
Cyprinidae) – Část 3: Průtočná metoda
OECD 203: Test akutní toxicity na rybách – výsledkem je koncentrace, která
vyvolá 50% úhyn ryb (96h LC50)
Používané druhy
Brachydanio rerio, Danio rerio (danio
pruhovaný, zebřička pruhovaná)
Poecilia reticulata (živorodka
duhová, paví očko)
Pimephales promelas (střevle potoční)
Cyprinus carpio (kapr obecný)
Oncorhynchus mykiss (pstruh duhový)
Chov ryb pro testy
StStřřevle potoevle potoččnníí ((Pimephales promelas)
• malá, malé nároky na prostor
• mimotělní vývoj
• široké rozmezí teplot i slanosti
• snadná kultivace v laboratoři
• krátká generační doba
• testy relativně levné
Danio pruhovaný (Brachydanio rerio)
• Čeleď: Cyprinidae - kaprovití
Původ: Asie
Velikost: do 4 cm
Teplota: 20 - 26 °C
pH: 6,5 - 7,5
Tvrdost vody: 5 - 12 °dKH
Potrava: všežravec (vločkové krmivo, nitěnky, dafnie)
Rozmnožování: Samečci jsou vybarvenější a oproti samičkám drobnější.
Rozmnožují se ve větší, hodně zarostlé nádrži s nízkou hladinou vody, při
teplotě okolo 25 °C. Na vytírací nádrž by mělo dopadat denní světlo.
Nejdříve do nádrže umístíme samičku a až po několika dnech přidáme
samce. Pokud jsme byli úspěšní, samička naklade na rostliny až 500 jiker.
Potěr se líhne po dvou dnech a soběstačný je po dalším dni.
• Známý genom, dobře
charakterizovaný druh
• Tisíce mutantních druhů
• Dobře popsaný model vývoje
obratlovců
• Modely pro některá lidská
onemocnění a poruchy
halančík japonský (Oryzias latipes):
• Zcela průhledná vajíčka
• Dostupné křížené
/transgenní /mutantní
druhy
• Známý genom
• X-Y určení pohlaví
• Sensitivní odpověď na
xenobiotika
Test akutní toxicity na rybách
Brachydanio rerio (2,5-3,5 měsíců, 2,5-3,5 cm, 21-25oC)
Poecilia reticulata (1,5-2,5 cm, 3-3,5 měsíce, 21-25oC)
Cyprinus carpio (2,5-3,5 cm, 20-24oC)
Oncorhinchus mykiss (4,5-5,5 cm, 13-17oC)
Další druhy: Oryzias latipes (halančík japonský), Lepomis
macrochirus (slunečnice modrá), Leuciscus idus (jelec
jesen)
Při nákupu nutná aklimatizace 10-14 dní, standardní krmení, chov jako při testu
Do testu – buď jen jedno pohlaví nebo vyrovnaný počet pohlaví
Účel: Test slouží ke stanovení vlivu látek a odpadních vod na chování a
přežívání ryb.
Princip: Test spočívá ve sledování chování a přežívání ryb v odstupňovaných
koncentracích testované látky po dobu 48 až 96 hodin
Testovací ryby
• Ryby by měly být zdravé a bez zjevných malformací
• Použitý druh by měl být zvolen podle praktických kritérií, jako je
jejich dostupnost po celý rok, snadný chov, vhodnost pro zkoušení,
relativní citlivost k chemickým látkám a jakékoliv další významné
ekonomické a biologické faktory.
3,0 ± 1,020 - 24Poecilia reticulata,
Živorodka duhová
6,0 ± 2,020-24Cyprinus carpio,
Kapr obecný
6,0 ± 2,012-17Onchorhynchus
mykiss, Pstruh duhový
3,0 ± 0,520-24Brachydanio rerio,
Danio pruhovaný
Doporučená délka ryb (cm)Doporučený rozsah T (°C)Doporučený druh
Chov
• Ryby by měly pocházet pokud možno z jednoho chovu a měly by být stejné
délky a stejného stáří. Musí být chovány nejméně 12 dní v následujících
podmínkách:
• voda - přírodní voda získána z nekontaminovaného zdroje stálé kvality
- pitná voda, upravená voda (čistota p.a.; kvalitní destilovaná, deionizovaná s
vodivostí menší než 5 µS/cm)
- pH od 6,0 do 8,5; tvrdost 10 - 250 mg·l-1 (vztaženo na CaCO3)
• osvětlení - 12-16 h denně
• koncentrace rozpuštěného kyslíku - 80% hodnoty nasycení vzdušným kyslíkem
• krmení - třikrát týdně nebo jednou za den; vysazení krmení 24 h před začátkem