Biochemické metody
01 – Úvod
Petr Zbořil

Obsah a rozsah předmětu
nZákladní principy metod užívaných při zkoumání živých systémů
nObecné fysikální a chemické principy
nInstrumentace
nAplikace, interpretace
nKombinace metod, strategie, možnosti

Literatura
nUvedená v sylabu.
nPraktické aplikace, instrumentace (konkretní vybavení, dodavatelé)
nLaboratorní příručky, návody
nStarší literatura – zdroj základních informací
•Keil, B. a kol.: Laboratorní technika biochemie
•Ferenčík, M. a kol.: Laboratórne biochemické metódy

Metody zkoumání
nAnalytický a syntetický přístup
nAplikace fyzikálních a chemických metod v biochemii
nMetody využívající biochemické principy (základ fyzikální)
nMetody shodné, speciálně aplikované, vyvinuté v biochemii (aplikace i jinde)

Typy metod
nSeparační
•Základní charakteristika – dochází k oddělování částic
nBez separace („analytické“)
•Využívají jedinečných vlastností komponent směsi, lze je sledovat bez separace
nAplikace – využití
•Izolace – jen separační
•Analytické užití (včetně separačních)
•Kombinace metod

Zvláštnosti biochemických postupů zkoumání
nStudium živých systémů po usmrcení
nKomplexnost směsí
nMikrokomponenty, minoritní složky
nLabilita, změny (artefakty)
nZásady práce při biochemickém zkoumání organizmů
•Plánování experimentů, příprava, rychlost
• Nízká teplota
•(pseudo)Fyziologické podmínky
•Eliminace škodlivých vlivů, protekce
•Vhodná kombinace metod, izolační protokol

Látková a energetická bilance
nLátková bilance
•Ideální – G1 = G2
•Reálně – G1 = G2 + Gz
nVýtěžek – G1 pro jednu složku nebo sumu
•Y,% = (G2/G1) . 100
nNeznámá stechiometrie, hrubý výtěžek
•Y,% = (G2.MA/G1.MB) . 100
nZnámá stechiometrie, A + X = B + Y
nÚrovně látkové bilance
•Pro všechny látky sumárně x pro jednu komponentu
•Pro celý proces x pro jeden úsek
nVýznam
•Úplnější bilance = podrobnější znalost o technologii
•Povaha Gz = stechiometrie x nedokonalá technologie (organizace aj.)
•Zdokonalení technologických pochodů, minimalizování ztrát, vedlejších produktů atd.)
n

Energetická bilance
nZákon zachování energie
nQ1 + Q2 + Q3 = Q4 + Q5
•1,4 – entalpie reaktantů a produktů
•2 – teplo dodané
•3 – teplo uvolněné při reakci
•5 – ztráty, teplo odvedené do okolí
nVýznam
•1 a 4 – konstantní
•3 – pro daný proces dané
•Q2 = f(Q5)
nZvýšené Q5
•vyšší teploty = vyšší Q5 x isolace
•Intensivní chlazení – vliv technologie (rychlost reakcí atd.)
nDifusní pochody
nSterilizace

n



n



n



n



n



n