Jména

                                                                                         Datum provedení


Stanovení koncentrace o-nitrobenzaldehydu v neznámém vzorku na HPLC

                                                                                    Datum odevzdání



Úkol

Naměř a správně zpracuj kalibrační křivku s vnitřním standardem pro o-nitrobenzaldehyd. Stanov
koncentraci o-nitrobenzaldehydu v neznámém vzorku.


Pracovní postup

Obecný postup pro vypracování kalibrační křivky s vnitřním standardem je popsán v dokumentu
Calibration curve 100311.doc a výpočet je připraven v dokumentu CalibrationCurve100317.xls.
Prostuduj tyto dokumenty než začneš pracovat.


o-nitrobenzaldehyd a methylbenzoát (který je možno použít jako vnitřní standard) se dají rozdělit
na chromatografické koloně s reversní fází C18 za použití eluentu směsi methanolu s vodou v poměru
3:2.


1. Zjisti absorpční spektra obou látek a stanov vhodnou vlnovou délku detekce.


2. Chceme, aby kalibrační křivka pokrývala oblast  nejméně od 0,01 mol . l^-1 do 0,0005 mol.l^-1.

Připrav vzorek s koncentrací analytu, která bude odpovídat zhruba koncentraci uprostřed kalibrační
křivky. Nastříkni tento vzorek na HPLC bez vnitřního standardu, abys zjistil retenční čas
o-nitrobenzaldehydu a velikost jeho odezvy. Také připrav a nastříkni samostatný vzorek vnitřního
standardu. Pokud jsou píky příliš od sebe vzdálené je možno zvýšit průtok eluentu kolonou. Podle
velikostí ploch píků nastav vhodnou citlivost detektoru. Plochy píků by měly být řádově srovnatelné
– do poměru 1/10 – podle toho zvol  vhodné poměry koncetrací analytu a vnitřního standardu.


3. Připrav vhodný vzorek ze středu kalibrační křivky, který bude obsahovat analyt i vnitřní
standard a proveď jeho měření. Na tomto vzorku ověř vhodnost zvolené analytické metody a pak již
zachovej podmínky pro měření celé kalibrační křivky i neznámého vzorku. Zejména zkontroluj, že
dojde k dobré separaci píků – dá se ovlivnit složením eluentu a rychlostí průtoku, že píky mají
podobou odezvu a nepřesahují rozsah. Pokud vše vypadá dobře dej se do vlastního měření kalibrační
křivku.


4. Každý vzorek změř dvakrát a pokud se poměr ploch liší o více než 5 % měření zopakuj potřetí.


5. Separátním navážením a naředěním analytu i vnitřního standardu připrav ‘neznámý vzorek‘,  změř
jeho chromatografickou odezvu a srovnej koncentraci získanou z navážky z kalibrační křivky.


Závěr

Diskutuj zvolenou vlnovou délku detekce, složení eluentu, přesnost stanovení na HPLC, přesnost
kalibrační křivky. PS. Italikou psaný text nahraď.