ISO 8692:2004
Pavla Polanská
Ivona Vychodilová
 určuje metodu stanovení inhibice růstu
jednobuněčných zelených řas látkami a směsmi
obsaženými ve vodě nebo odpadní vodou
 použitelná pro látky které jsou snadno rozpustné ve
vodě, popř. slabě rozpustné org. a anorg. látky, těkavé
sloučeniny, těžké kovy, odpadní voda (ISO 14442, ISO
5667-16)
 Desmodesmus subspicatus (Scenedesmus subspicatus )
 Pseudokirchneriella subcapitata (Selenastrum
capricornutum)
 Scenedesmus quadricauda (ČR)
řád: Chlorococcales
příprava růstového média
předkultivace inokula
příprava zkoušených a kontrolních sad
inkubace
měření
 2-5 dní před začátkem zkoušky
 dostatečně nízká hodnot buněk (udržení
exponenciálního růstu)
 zvolit vhodné koncentrace testované látky
(ECx – koncentrace zkoušeného vzorku, která má za následek x%
snížení µ ve vztahu ke kontrolním vzorkům)
 příprava zkoušeného vzorku (filtrace, neutralizace,
rozpuštění nevodných vzorků)
 jednotlivé koncentrace vzorku (nejméně tři replikáty)
+ 6 kontrolních vzorků
 Lze provést limitní zkoušku s jedinou koncentrací k prokázání
nepřítomnosti toxicity. Počet replikátů pro tuto jedinou
koncentraci by měl být 6
 počáteční hustota buněk by neměla přesáhnout
104 buněk/ml
 inkubace při ~ 23°C
 kontinuální bílé světlo
 kontinuální třepání, míchání, nebo
provzdušňování (usnadnění přestupu CO2 ze vzduchu do
média)
 dostatečné uzavření nádob
 zkouška trvá nejméně 72 hodin, každých 24
hod. se měří hustota buněk
- počítač částic
- mikroskop a počítací komůrka
- nepřímo – fluorimetrie, turbidimetrie,
fotometrie
 kontrola pH, kontrola vzhledu buněk a
totožnosti testovaného org.
 sestavení růstové křivky pro každou zkoušenou koncentraci a
kontrolu
 výpočet průměrné specifické růstové rychlosti µ, pro každou
zkoušenou kulturu:
 podle střední hodnoty µ pro každou zkoušenou a kontrolní sadu
replikátů se vypočítá procentuální inhibice ze vzorce:
 regresní analýzou určíme ECx (koncentrace
zkoušeného vzorku, která má za následek x% snížení µ ve vztahu
ke kontrolním vzorkům)
- ECx prokazuje potenciální riziko, ale nemůže
být použita přímo pro předpověď účinku v
přirozeném prostředí
 při interpretaci výsledků se bere v úvahu tvar
růstových křivek (např: zpožděný nástup růstu)