TEST INHIBICE POHYBLIVOSTI
Daphnia magna Straus
(Cladocera, Crustacea)
TEST AKUTNÍ TOXICITY
Brózman Ondřej
Kolářová Edita
OBECNÉ INFORMACE
 Norma:
o ČSN EN ISO 6341:1996 přijatá CEN 28.1.1996
 Princip:
o Zjištění akutní toxicity látek pro planktonní organismy
o Stanovení koncentrace, která imobilizuje 50%
exponovaných jedinců Daphnia magna za 24/48 hodin
(24/ 48h-EC50i)
 Provedení: jedno nebo dvoustupňové provedení
o Předběžný test (rozsah koncentrací)
o Vlastní test (přesná hodnota 24/48h-EC50i nebo koncentrace
odpovídající imobilizaci 0% a 100%)
* S vlastním testem současně série kontrolních roztoků!!!
PODMÍNKY TESTU
 Daphnia magna Straus:
o Nejméně 3. generace, získaná acyklickou partenogenezí
o Stáří testovaných jedinců maximálně 24h!!!
 Fotoperioda:
o Skladování roztoků a samotný test prováděny při fotoperiodě
16h světla/8h tmy
o U látek podléhajícím fotodegradaci je skladování a testování
prováděno ve tmě
 Ovzduší:
o Teplota 20°C ± 2°C
o Prosté výparů nebo prachu toxických pro Daphnia magna
PODMÍNKY TESTU
 Chemikálie:
o Ředění chemikálií ve vodě deionizované, popř. destilované
nebo demineralizované s měrnou elektrickou vodivostí
maximálně 0,1 μS/m
o Hodnota pH ředící vody 7,8 ± 2
o Suma koncentrací Ca, Mg v roztoku je 250 mg/l ± 25 mg/l v
poměru 4:1
o Koncentrace rozpuštěného kyslíku nad 7 mg/l
o Možnost využití rozpouštědel s nízkou toxicitou pro Dafnie,
konečná koncentrace rozpouštědla v roztoku max. 0,1 ml/l
o Kultivační médium vhodné připravit den před testováním
TESTOVÁNÍ
 Do řady zkušebních nádob (nejčastěji 100 ml) se odměří
zvyšující se objemy koncentrace testované látky a
doplní ředící vodou
 Přidá se Daphnia magna, max. počet 20 jedinců na
nádobu a max. hustota 5 jedinců na 10 ml roztoku
 Kontrolní sada pro každou řadu zkoušek!!!
 Během zkoušky se organismy nekrmí a teplota se
udržuje na 20°C ± 2°C
 U kontroly nesmí být imobilizace větší než 10% !!!
 Na konci zkušební doby (24/48h) se spočítají mobilní a
imobilní jedinci (nejsou schopni se po 15 vteřinách od rozmíchání
samovolně rozplavat)
VYHODNOCENÍ
 Spočítání mobilních a imobilních jedinců v jednotlivých
koncentracích testované látky
 Výpočet procenta imobilizovaných jedinců:
počet imobilizovaných jedinců
celkový počet jedinců
 Grafickou interpolací je zjištěna 24/48h-EC50i
 Výsledek je pro odpadní vody vyjádřen v ml/l a pro
chemické látky v mg/l
 Jednotlivé hodnoty EC50 se nesmí lišit o více jak 30%!!!
x 100% =
PŘÍKLAD
 Předběžný test:
→ rozsah ředění,
za kterých má být
test proveden je od
0,35% do 1%
Ředění
[%]
Počet mobilních
jedinců
90 0
35 0
10 0
3,5 0
1 0
0,35 5
0,1 5
0,035 5
0,01 5
PŘÍKLAD
 Vlastní test:
Ředění % Mobilní Daphnia Magna v
baňce (počet jedinců)
Počet jedinců
T
P
%
1 2 3 4 celkem
0,00
(kontrola)
0,35
0,48
0,62
0,80
1,00
5
5
2
3
1
0
5
5
3
1
0
1
5
3
4
1
2
0
5
4
3
2
1
0
20
17
12
7
4
1
0
15
40
65
80
95
T – počet mobilních jedinců Daphnia magna při každé koncentraci na konci
zkoušky
P – procento imobilizovaných jedinců Daphnia magna při každé
koncentraci