METODA PRO STANOVENÍ AKUTNÍ ORÁLNÍ TOXICITY PRO VČELU MEDONOSNOU metoda C.16 podle přílohy směrnice 2001/59/ES Sylvie Nedělová Úvod • Tato zkouška toxicity je laboratorní metodou určenou k posouzení orální akutní toxicity přípravků na ochranu rostlin a jiných chemických látek pro dospělou dělnici včely medonosné • Zkouška akutní orální toxicity se provádí s cílem stanovit vlastní toxicitu pesticidů a jiných chemických látek pro včely • Tato metoda může být použita zejména ve stupňovaných programech hodnocení nebezpečnosti pesticidů pro včely založených na postupném přechodu od laboratorních zkoušek k semi-polním experimentům Úvod • Akutní orální toxicita: je nepříznivý účinek, ke kterému dojde nejpozději do 96 h od orálního podání jedné dávky zkoušené látky • Dávka: je množství požité zkoušené látky. Vyjadřuje se hmotností (μg) zkoušené látky na jeden testovací organismus • LD50 (střední letální dávka) orálně: je statisticky vypočtená jednotlivá dávka látky,která může po orálním podáním způsobit úhyn 50 % jedinců Zkušební metoda- včelstvo • Použijí se mladé dospělé včely dělnice z téhož plemena, tj. včely stejného stáří, stejně krmené, stejného druhu atd. • Včely by měly být získány z přiměřeně krmeného, zdravého včelstva s matkou • Měly by být vybrány ráno v den zkoušky nebo by měly být vybrány večer před zkouškou a drženy v podmínkách zkoušky do příštího dne Zkušební metoda- včelstvo Apis mellifera • Shromážděné včely se náhodně rozdělí do klícek,které se náhodně umístí v experimentální místnost • Včely by měly být drženy v temnu v experimentální místnosti při teplotě 25 ± 2 °C • Před začátkem zkoušky mohou včely až 2 h hladovět • Jako potrava se používá vodný roztok cukru Zkušební metoda- podstata • Dospělé dělnice včely medonosné se exponují řadě dávek zkoušené látky rozptýlené do 50% cukerného roztoku • Včely jsou poté krmeny stejným roztokem neobsahujícím zkoušenou látku • Mortalita se zaznamenává denně během alespoň48 hodin a porovnává se s kontrolními hodnotami • Výsledky zkoušky se analyzují s cílem vypočítat LD50 pro 24 h a 48 h a v případě prodloužené studie pro 72 h a 96 h Zkušební metoda- podstata • Zkouška trvá 48 h od okamžiku, kdy byl zkušební roztok nahrazen samotným cukerným roztokem • Vzroste-li mortalita během prvních 24 h o 10 %,zkouška se prodlouží na 96 h Zkušební metoda- validita • Má-li být zkouška platná, musí být splněny následující podmínky: — průměrná mortalita u všech kontrolních skupin nesmí na konci zkoušky překročit 10 %, — LD50 pro referenční látku odpovídá předpokládané hodnotě Zkušební metoda- výsledky • mortalita pro každou zkoušenou koncentraci v každém čase pozorování • graf křivek závislosti dávka-odezva na konci zkoušky • hodnoty LD50 s 95% intervaly spolehlivosti pro každý doporučený čas pozorování • mortalita v kontrolních skupinách • jiné pozorované nebo naměřené biologické účinky, např. neobvyklé chování včel, rychlost spotřebování potravy v exponovaných a neexponovaných skupinách