Ukázky: CCM katalog Anaerostat + generátor anaerobní atmosféry Plastové kličky Termostat se třepačkou Očkovania kultivace Bakteriální druh = jasně vymezená skupina navzájem příbuzných kmenů, zahrnujících typový kmen = sdílí 70% a vyšší DNA-DNA homologii komplementárních párů bazí (DNA reasociace) = vykazuje, až na výjimky, shodné fenotypové znaky a současně má některé odlišné znaky od jiných skupin Kultura = MO kultivované za laboratorních podmínek Preočkovaní = přenos inokula do čerstvého média za účelem pomnožení, izolace, oživení, přečištění,... Izolace - pomocí křížového roztěru, selektivních médií Bakteriální kolonie = klon jedné buňky Kultivace - různé podmínky (izolát, sbírkový či průmyslový kmen) — Statická x kontinuální (ubývání živin, přibývání metabolitů,..) x submerzní=třepaná, vzdušněná — Anaerobní • Kultura - čistá x smíchaná x technická či průmyslová • Zisk čisté kultury -> selektivní médium, křížový roztěr • Křížový roztěr = postupné zřeďování původní kultury za účelem zisku jednotlivých kolonií (http://oldJf3xuni.cz/mikrobiologie/bak/uceb/obsah/ockovani/ockovani.h tm) • Kultivace - co nej rychlejší (zejména klinické izoláty, epidemiologie) či za účelem zisku biomasy • odběr vzorků (sterilita x půda x vody) - záleží i na zpracování vzorku • CFU - colony forming units = KTJ - kolonie tvořící jednotky • Názvosloví - stafylokok x Stophylococcus • Izolace - Proč? Jak? Pivovarské kvasinky Mlékárenské kultury KM B*>npst jtwdasí gatchfct voc* PeUxeren Lasu™ íl Oiŕfe »pŕcui pomnožení, přečištění, izolace, oživení kultury •STERILITA!!!!! Vzduch, ruce, dech, pracovní plocha •Mikrobiologický perník z Tvrdého 14 a z internetu IPTG +lOOuM IPTG Kultivace - zisk kolonie MO = klony jedné buňky -> vzhled je závislý na typu média, kultivaci, stáří kultury • Kultivace - je předstupeň izolace, identifikace, stanovení citlivosti na ATB, atd. • většina vzorků je nekultivovatelných • CCM - z katalogu; izolát - odvodit podmínky pro růst - LIŠÍ SE od přirozeného výskytu (charakter růstu i vzhled) • na misce/ v médiu - buňky v různé fázi růstu -> růstová křivka (i DIAUXIE) Počet buněk/délka růstu i i i i i i I I 1 I_ 1-lag fáze; 2-fáze zrychlujícího se růstu; 3 - exponenciální fáze růstu; 4 - fáze zpomaleného růstu; 5 - stacionární fáze růstu; 6 - fáze odumírání • Diauxie - postupné využití substrátu (např. nejdříve využije jednoduchý zdroj - glukóza->první vrchol; potom teprve nastartuje metabolizmus k využití složitějšího substrátu -laktóza ->druhý vrchol) Time (hours) • !!!!! STRIKTNÍ X TOLERANTNÍ!!!! • nároky na 02 aerofilní mikroaerofilní fakultativně anaerobní anaerobní (anaerostat, vrstva parafínu, svíčka,..) kapnofilní aerotolerantní • nároky na teplotu psychrofilní (pod 2o°q mezofilní (20-40°c) termofilní (nad 40°C, optimum cca 50°C, extrém až 100°C) • nároky na tlak - barofilní, barotoleratní • nároky na redoxpotenciál, pH • nároky na živiny heterotrof fotoheterotrof fotoautotrof fotolitotrof = litotrof fotoorganotrof autotrof Uchování - šikmé agary, misky (4°C)-vysychání, kondenzující voda - kultivace dnem vzhůru! - glycerol, lyofilizáty (prášek vzniklý mražením kultury ve vakuu), zamražené v glycerolu Postup •MVyhodnocení z minulého cvičení (kontaminace ano x ne??)!! •Aseptická práce!! Žíhat hrdla a klíčky!!! Misky otevírat co nejméně!!! •POPSAT SI SKLO (datum jméno,kultura) •Vyžíhat kličku a nechat zchladnout •„hádek" na šikmý agar odspodu •Tekuté půdy-těsně nad okraj hladiny, na stěnu zkumavky, postupně vmíchat do média (osmotický šok) •Petriho miska - křížový roztěr (lx čistá + lx směsná kultura G+ a G-) •Petriho miska - rozdělit na čtvrtiny -> „hádkem" od okraje ke středu •Kultivace v termostatu 30°C po dobu 24-48 hod (do příštího cvičení se nechají při pokojové teplotě) Křížový roztěr (Streak Plate) Kultury ve cvičení G- • Escherichia coli CCM 3954 • Pseudomonas putida • Serratia marcescens CCM 303 G+ • Kocuria rosea CCM 839 • Micrococcus luteus CCM 169 • Bacillus cereus CCM 2010 • Staphylococcus aureus SA 812 kvasinky • Saccharomyces cerevisiae • Saccharomyces pastorianus