Vliv barviv na růst MO Cíl: Stanovit citlivost MO k barvivům (krystalové violeti) Bakteriostatické působení barviv • některá organická barviva mají bakteriostatický účinek na grampozitivní bakterie i v koncentracích, kdy gramnegativní bakterie ještě rostou → využití pro přípravu selektivních půd (např. stanovení koliformních bakterií) • krystalová nebo gencianová violeť, malachitová zeleň, methylenová modř, trypaflavin aj. • selektivní pro streptokoky – akridinová oranž, etylová violeť, anilínová a trypanová modř Buněčná stěna bakterií Rozdíly Gram-pozitivní Gram-negativní Složení buněčné stěny bakterií • ENDO agar – bazický fuchsin Fung a Miller (1973) 30 bakteriálních kmenů 42 barviv M Krumwiede a Pratt (1914) Vliv anilínových barviv na bakterie Bakteriostatické působení roztoku krystalové violeti Potřeby : • 1% vodný roztok krystalové violeti (nezaměňovat s roztokem označeným Gram I) • bujonové kultury Bacillus subtilis Enterobacter aerogenes Escherichia coli Micrococcus luteus • 4 sterilní zkumavky, sterilní destilovaná voda a pipety • 4 sterilní Petriho misky • 4 zkumavky s 18 ml MPA Postup: • aseptická práce!!! • ředění roztoku krystalové violeti: 1x (neředěný vzorek),10x, 100x a 1000x • rozehřát 4 zkumavky s MPA ve vodní lázni • pipetovat roztok violeti do sterilní misky a přelít MPA • po ztuhnutí rozdělit fixem dno misek na čtvrtiny • očkovat „hádkem“ 4 kmeny bakterií • inkubace při 37°C 48 hod • odečet růstu bakterií • výsledky zapsat do tabulky • srovnat růst gram-negativních bakterií s gram-pozitivními Ředění krystalové violeti