Bi6120c Rostlinné explantáty           Sylabus cvičení                       Jaro 2013


01. (20.2.2013) Úvod do praktika: podmínky axenické kultury a požadavky na vybavení laboratoře,
typy kultur, kultivační nádoby a různé způsoby kultivace, seznámení s kultivačním systémem RITA®,
bezpečnost a organizace práce, protokoly, literatura.

02. (27.2.2013) Nácvik práce ve sterilních podmínkách: sterilizace nástrojů, vody, nádob, živných
médií, pracovního prostoru, metody povrchové desinfekce semen, sterilní výsev semen, spor kapradin
apod. (Nicotiana, Daucus, Drosera, Linum, Phalaenopsis, Pteris).

03. (6.3.2013) Příprava živného média: různé varianty tekutého a agarem ztuženého média (MURASHIGE
– SKOOG 1962, GAMBORG a kol. 1968, atd.), příprava a rozlití do kultivačních nádob.

04. (13.3.2013) Nácvik práce ve sterilních podmínkách: pasážování (přesazování explantátů do
čerstvého média) sterilních kultur (Drosera, Dionaea, Saintpaulia, Streptocarpus, Nephrolepis).

05. (20.3.2013) Mikropropagace: Odvození primární kultury bylin, různé zdroje explantátů - list,
stonek, rhizom, A. regenerace de novo: Saintpaulia, Streptocarpus, Begonia, Nephrolepis, B.
reprodukce: množení nodálními segmenty (Rosa), srovnání multiplikačního koeficientu a vitrifikace
na agarem ztužené půdě a v kultivačním systému RITA®, porovnání kultivačních podmínek za různých
režimů osvětlení (PAR, teplota) v obou kultivačních systémech.

06. (27.3.2013) Kalusové kultury: A. iniciace kalogeneze - založení primární kultury kambiálních
segmentů kořene (Daucus), založení kalusové kultury ze segmentů hypokotylů klíčních rostlin,
pasážování kalusové kultury.

07. (3.4.2013) Meristémové kultury: A. Izolace apikálních a axilárních meristémů bylin a dřevin
(Dianthus, Clematis, Rubus); B. indukce tuberizace na nodálních segmentech (Solanum tuberosum); C.
převod rostlin do nesterilních podmínek, aklimatizace (Saintpaulia, Streptocarpus, Nephrolepis,
Drosera, Dionaea). Detekce stresu v průběhu aklimatizace rostlin fluorometrickými metodami.

08. (10.4.2013) A. Izolace zygotických embryí: založení kultury – desinfekce semen, izolace embryí
a jejich inokulace do živného média (Picea, Zea, Capsella). B. Kultury nižších rostlin: kultivace
dřevokazných hub (Pleurotus ostreatus, Lentinus tigrinus)– udržovací kultury a příprava očkovacího
inokula jako příklad suspenzní kultury.

09. (17.4.2013) Fytopatologie in vitro: certifikace čistoty kultur, test čistoty kultury Solanum
tuberosum, Saintpaulia ionantha apod. – příprava a rozlití testovacího média, inokulace explantátů.

10. (24.4.2013) A. Somatická embryogeneze: indukce přímá – apikální meristémy hrachu (Pisum),
poupata úborů cinerárie (= popelivky) (Senecio cruentus – hybrid), indukce nepřímá – kalus mrkve
(Daucus carota), srovnání produkce somatických embryí na agarem ztužené půdě a v kultivačním
systému RITA®. B. Indukce haploidních rostlin: Založení prašníkové kultury, srovnání regenerační
kapacity různých linií tabáku (Nicotiana).

11. (15.5.2013) Kryoprezervace: izolace axilárních meristémů brambor (Solanum tuberosum),
enkapsulace meristémů do alginátu, dehydratace alginátových perel a jejich následné rychlé
zmrazování v N2.

12. (20.5.2013) Exkurze do Laboratoře rostlinných explantátů Mendelovy univerzity v Brně a
Botanické zahrady a arboreta Mendelu. Kontrola protokolů a zápočet.

     Návody ke cvičením v isu                              změna programu vyhrazena (podle potřeby
kultur)