Správná laboratorní praxe v chemické laboratoři 4. Měření Ing. Branislav Vrana, PhD. vrana@recetox.muni.cz VALIDACE ANALYTICKÝCH METOD VALIDACE ANALYTICKÝCH METOD • Replikace • Testy výtěžnosti • Slepý vzorek – tzv. činidlový blank – tzv. matricový blank • Alternativní postupy • Alternativní detekce • Referenční materiály DOBR� LABORATORNÍ PR�CE • Před zahájením analýzy – lokalizovat vzorky; – přesvědčit se, že má k disposici platný výtisk standardního operačního postupu; – přečíst si postup, pokud jej zevrubně nezná; – ověřit, že jsou všechny potřebné přístroje dostupné a v dobrém stavu, čisté a správně kalibrované; – naplánovat sled činností a nápl� každého kroku DOBR� LABORATORNÍ PR�CE – uvážit všechna rizika související s postupem a s používáním některých činidel. – je pro práci vymezena dostatečná a čistá plocha na pracovním stole; – připadá-li v úvahu zvýšené riziko, může být nutný dozor. – ověřit, že je potřebné nádobí čisté, neporušené a podle potřeby kalibrované. – ověřit, že jsou zásoby činidel, kalibračních standardů a referenčních materiálů dostatečné a v odpovídajícím stupni čistoty. – naplánovat postupy likvidace například použitých vzorků, činidel a kontaminovaných zařízení; – naplánovat postupy očisty zařízení. V průběhu analýzy • zjistěte detaily o každém vzorku, jeho stav a odkazy na připojené doklady; • ověřte ještě před otevřením vzorkovnic, že vzorky mají správnou teplotu; • odeberte vzorky a zajistěte, aby byl každý dostatečně označen v každém kroku analýzy, aby byl sledovatelný zpět k původnímu vzorku; • pokud se používá přístroj vícekrát pro různé vzorky, zajistěte potřebné čištění mezi každým použitím, abyste zamezili vzájemné kontaminaci; • pokud postup nestanoví jinak, je správný sled činností: potřebná kalibrace; je-li kalibrace uspokojivá, proveďte kontroly kvality; pokud jsou kontroly kvality uspokojivé, proveďte analýzy vzorků. Když se vzorky analyzují v sériích, jsou během série nutné pravidelné kontroly kalibrací a kvality; postupujte přesně podle písemného popisu postupu. • zaznamenávejte srozumitelně pozorování, data a neobvyklé detaily postupu, tak jak se to doporučuje. Po analýze • ze získaných dat vypočítejte požadované odpovědi, přičemž hledejte obvyklé chyby jako je nesouhlas duplikátních vzorků, pozitivní výsledky tam, kde očekáváme negativní, atd.; • kontrolujte přenosy dat a výpočty, s výhodou někým jiným než osobou, která pracovala na úkolu.; • vzorky se musí uchovávat alespo� do té doby, než bude napsána vyhovující zpráva. • Vzorek se může uchovávat i déle podle zásad laboratoře, nebo se může vrátit zákazníkovi nebo zlikvidovat. • oblast laboratoře používaná k práci, příslušné vybavení a přístroje se musí dekontaminovat, očistit a ponechat pro další práci vyčištěné KALIBRACE MĚ�ENÍ • Kalibrování přístroje - porovnání měřené veličiny s hodnotou reference – primární standardy - systém mezinárodně uznávaných etalonů – sekundární kalibrační standardy – přenosné kalibrační standardy – pracovní kalibrační standardy • návaznost = schopnost odkazovat zpět k jedinému kalibračnímu standardu – kalibrace použitím čistých chemických sloučenin – matricové referenční materiály CHEMICKÉ KALIBRAČNÍ STANDARDY A REFERENČNÍ MATERI�LY Referenční materiál Materiál nebo látka, jejíž jedna nebo více hodnot vlastností je dostatečně homogenní a dobře stanovená, aby mohl(a) být použit(a) ke kalibraci přístroje, posouzení měřicí metody nebo k přiřazení hodnot materiálů Certifikovaný referenční materiál (CRM) Referenční materiál doprovázený certifikátem, jehož jedna nebo více vlastností jsou certifikovány postupem, který vytváří návaznost na správnou realizaci jednotky, v níž jsou hodnoty vlastností vyjádřeny, a jehož každá certifikovaná hodnota je doprovázena nejistotou na uvedené hladině spolehlivosti POUŽITÍ CRM • kalibrace a verifikace měřicích procesů za běžných podmínek, • interní kontrola kvality a programy zabezpečení kvality, • ověření správného používání normovaných metod, • vývoj a validaci nových postupů měření, • definování hodnot jiných materiálů, které se mohou používat jako sekundární kalibrační standardy. Externí kalibrace Vnitřní kalibrace • Zahrnuje přidání chemického kalibračního standardu přímo do vzorku, takže se standard a vzorek měří fakticky současně • vnitřní standard - přímo analyt nebo blízká látka. Ta se obvykle vybírá tak, aby nebyla přítomna ve vzorku, ale aby se chovala v měřicím procesu podobně jako analyt • standardní přídavek - vnitřní standard stejný jako analyt �ÍZENÍ KVALITY • Slepé vzorky • Vzorky řízení kvality (QC) • Opakované vzorky • Tajné kontrolní vzorky • Chemické kalibrační standardy a přídavky (spiky)