Úloha č.3 - Adsorpce na půdu
Úkol:
Stanovte Kd fenolu s využitím HPLC
3.A Adsorpce fenolu na půdu
3.B Extrakce vzorků půdy ultrazvukem
3.C Stanovení fenolu pomocí HPLC
3.D Vyhodnocení HPLC chromatogramu
3.A – Adsorpce fenolu na půdu
Pomůcky:
 4 x centrifugační zkumavka (objem 50 ml)
 třepačka
 centrifuga
 pipety, špičky
 1 x odměrný válec (50 ml)
 4 x vialka (2 ml)
 analytické váhy
 filtrační papír
 laboratorní rukavice
 půda – více uhlíku (5,5%), málo jílu
Chemikálie:
 0,01M roztoku CaCl2
 roztok fenolu v methanolu (100 mg/l)
Postup práce:
 do 4 centrifugačních zkumavek (V = 50 ml) navažte přibližně 5 g přesáté půdy
a zkumavky popište
 ke vzorkům půd přidejte 36 ml 0,01M roztoku CaCl2 a 4 ml roztoku fenolu
v methanolu
 vše umístěte na třepačku
 v časových intervalech 0, 3, 6 a 24 hodin odeberte vždy jednu zkumavku
 centrifugací oddělte půdní a vodnou suspenzi (4000 rpm/10 min)
 ve všech časech odeberte 1 ml vodné fáze do předem připravené minivialky
a uložte do lednice do provedení analýzy
 v časech 0, 6 a 24 hodin oddělte půdní suspenzi a nechte ji do druhého dne
vysušit na filtračním papíře
3.B – Extrakce vzorků půdy ultrazvukem
Pomůcky:
 ultrazvuková lázeň
 analytické váhy
 vakuové filtrační zařízení Baker
 8 x kádinka (100 ml)
 2 x odměrný válec (25 ml)
 stopky
 Pasteurovy pipety
 4 x vialka (40 ml)
 4 x vialka (2 ml)
 3 x nylonový filtr
 dusík na odpařování
Chemikálie:
 methanol
Postup práce:
 připravte ultrazvukovou lázeň
 vysušenou půdu zvažte a nasypte do kádinky
 ke vzorku půdy nalijte 15 ml methanolu
 extrahujte 3x15 minut
 vždy po každém 15-minutovém cyklu extrakce odeberte Pasteurovou pipetou
rozpouštědlo do předem připravené kádinky
 extrakt přefiltrujte přes Bakera
 objem roztoku ve vialce odpařte pod proudem dusíku na objem 1 ml
 pomocí Pasteurovy pipety převeďte zahuštěný extrakt do předem připravené
minivialky a vialku vypláchněte malými dávkami methanolu
 je-li nutné, přefiltrujte vzorek přes filtřík
 vialku dobře uzavřete a uložte v ledničce do dalšího zpracování
CAS No.*
 methanol 67-56-1
3.C Stanovení fenolu pomocí HPLC
Pomůcky:
 kapalinový chromatograf
 chromatografická kolona Supelcosil LC-18
Chemikálie:
 voda čištěná na zařízení Milli-Q
CAS No.*
 methanol 67-56-1
 kyselina fosforečná 7664-38-2
Postup práce:
1) příprava mobilní fáze
 solvent A: 150 ml redestilované vody + 80 μl kyseliny fosforečné + 100
ml methanolu
 solvent B: 100 ml methanolu
 průtok mobilní fáze: 0,15 ml/min
 isokratická eluce: 90% A+10% B
 nástřik 20 μl
 analýza 1 vzorku ~ 13 min
2) detekce
detekce – 230 nm, 280 nm
3) metoda: c/2/hpchem/methods/Petra/fenol.m
3.D - Vyhodnocení HPLC chromatogramu
Postup práce:
Úkoly:
 z koncentrací získaných z HPLC stanovení fenolu ve vodné a půdní frakci
vypočítejte
adsorpční koeficient Kd