Úloha č. 4 - Vytěkávání z půdy: Stanovte Ksa fenolu
s využitím HPLC
Úkol:
Stanovte Ksa fenolu s využitím HPLC
4.A Příprava experimentu a odběr vzorku vzduchu nad kontaminovanou půdou
4.B Extrakce vzorku půdy ultrazvukem
4.C Extrakce exponovaného filtru ultrazvukem
4.D Stanovení fenolu pomocí HPLC
4.E Vyhodnocení HPLC chromatogramu
4.A – Příprava experimentu a odběr vzorku vzduchu nad kontaminovanou půdou
Pomůcky:
 1 x odpařovací komora
 1 x nízkoobjemové čerpadlo
 Pasteurovy pipety
 4 x polyuretanový filtr (2x čištěný, 2x nečištěný)
 analytické váhy
 laboratorní rukavice
 půda – více uhlíku, málo jílu (5,5%)
Chemikálie:
 roztok fenolu v methanolu (100 mg/l)
Postup práce:
 do předem připravené odpařovací komory umístěte ~ 5g přesáté půdy
 na půdu pomocí Pasteurovy pipety aplikujte ve formě kapek 1 ml roztoku
fenolu v methanolu
 přes noc nechejte ustavit rovnováhu
 na vstupu odpařovací komory umístěte nečištěný PUF

 na výstupu odpařovací komory umístěte nízkoobjemové čerpadlo spolu
s čištěným PUF
 ráno spusťte 24-hodinový odběr
 zapište stav timeru před odběrem do protokolu
 po 24 hodinách vypněte čerpadlo a zapište stav timeru
 vyjměte exponovaný filtr a zabalte ho do dvou vrstev alobalu a uskladněte
v mrazícím boxu
4.B – Extrakce vzorku půdy ultrazvukem
Pomůcky:
 ultrazvuková lázeň
 analytické váhy
 vakuové filtrační zařízení Baker
 2 x kádinka (100 ml)
 1 x odměrný válec
 2 x vialka (40 ml)
 1 x vialka (2 ml)
 1 x nylonový filtr
 dusík na odpařování
Chemikálie:
 methanol
Postup práce:
 připravte ultrazvukovou lázeň
 vysušenou půdu zvažte a nasypte do kádinky
 ke vzorku půdy nalijte 15 ml methanolu
 extrahujte 3x15 minut
 vždy po každém 15-minutovém cyklu extrakce odeberte Pasteurovou pipetou
rozpouštědlo do předem připravené kádinky
 extrakt přefiltrujte přes Bakera
 objem roztoku ve vialce odpařte pod proudem dusíku na objem 1 ml
 pomocí Pasteurovy pipety převeďte zahuštěný extrakt do předem připravené
minivialky
a vialku vypláchněte malými dávkami methanolu
 je-li nutné, přefiltrujte vzorek přes filtřík
 vialku dobře uzavřete a uložte v ledničce do dalšího zpracování
4.C Extrakce exponovaného filtru ultrazvukem
Pomůcky:
 ultrazvuková lázeň
 Pasteurovy pipety
 2 x kádinka
 1 x odměrný válec
 1 x vialka (20 ml)
 1 x vialka (2 ml)
Chemikálie:
 methanol
Postup práce:
 připravte ultrazvukovou lázeň
 exponovaný PUF vložte do kádinky
 přilijte 100 ml methanolu
 extrahujte 45 minut
 po celém cyklu extrakce odeberte Pasteurovou pipetou rozpouštědlo do
předem připravené kádinky
 objem roztoku ve vialce odpařte pod proudem dusíku na objem 1 ml
 pomocí Pasteurovy pipety převeďte zahuštěný extrakt do předem připravené
minivialky a vialku vypláchněte malými dávkami methanolu
 vialku dobře uzavřete a uložte v ledničce do dalšího zpracování
4.D Stanovení fenolu pomocí HPLC
Pomůcky:
 kapalinový chromatograf
 chromatografická kolona Supelcosil LC-18
Chemikálie:
 voda čištěná na zařízení Milli-Q
 kyselina fosforečná
 methanol
Postup práce:
1) příprava mobilní fáze
 solvent A: 150 ml redestilované vody + 80 μl kyseliny fosforečné + 100
ml methanolu
 solvent B: 100 ml methanolu
 průtok mobilní fáze: 0,15 ml/min
 isokratická eluce: 90% A+10% B
 nástřik 20 μl
 analýza 1 vzorku ~ 13 min
2) detekce
detekce – 230 nm, 280 nm
3) metoda: c/2/hpchem/methods/Petra/fenol.m
4.E - Vyhodnocení HPLC chromatogramu
Postup práce:
Úkoly:
 z koncentrací získaných z HPLC stanovení fenolu ve vzduchu a půdní frakci
vypočítejte rozdělovací koeficient půda-vzduch Ksa