Ukázky: CCM katalog Anaerostat
+ generátor anaerobní atmosféry Plastové kličky Termostat se třepačkou
Očkovania kultivace
Bakteriální druh
= jasně vymezená skupina navzájem příbuzných kmenů,
zahrnujících typový kmen
= sdílí 70% a vyšší DNA-DNA homologii komplementárních
párů bazí (DNA reasociace)
= vykazuje, až na výjimky, shodné fenotypové znaky a současně má některé odlišné znaky od jiných skupin
Kultura = MO kultivované za laboratorních podmínek
Preočkovaní = přenos inokula do čerstvého média za účelem pomnožení, izolace, oživení, přečištění,...
Izolace - pomocí křížového roztěru, selektivních médií
Bakteriální kolonie = klon jedné buňky
Kultivace - různé podmínky (izolát, sbírkový či průmyslový kmen)
— Statická x kontinuální (ubývání živin, přibývání metabolitů,..) x submerzní=třepaná, vzdušněná ^^^^^^^m
— Anaerobní
• Kultura - čistá x smíšená x technická či průmyslová
• Zisk čisté kultury -> selektivní médium, křížový roztěr
• Křížový roztěr = postupné zřeďování původní kultury za účelem zisku jednotlivých kolonií
(http://old.lf3.cuni.cz/mikrobiologie/bak/uceb/obsah/ockovani/ockovani. htm)
• Kultivace - co nej rychlejší (zejména klinické izoláty, epidemiologie) či za účelem zisku biomasy
• odběr vzorků (sterilita x půda x vody) - záleží i na zpracování vzorku
• CFU - colony forming units = KTJ - kolonie tvořící jednotky
= životaschopná buňka schopná vytvořit kolonii
• Názvosloví - stafylokok x Stophylococcus
• Izolace - Proč? Jak?
Očkování-čerstvé médium -> pomnožení, přečištění, izolace, oživení kultury
•STERILITA!!!!! Vzduch, ruce, dech, pracovní plocha
Křížový roztěr -> zisk jednotlivých kolonií
•Oenococcus oen/Jaktobacily        Staphylococcus aureus
•„Mikrobiologický perník" z Tvrdého 14
(aneb jak baví mikrobiologové pře Vánocemi)
jiný příklad izolace jednotlivých kolonií
Kultivace - zisk kolonie MO = klony jedné buňky
-> vzhled je závislý na typu média, kultivaci, stáří kultury
>E.coli na EN DO ag
Jiř>
S
wa,:....v.
•£. coli na krevním agaru
E.coli na EMB agaru
• Kultivace - je předstupeň izolace, identifikace, stanovení citlivosti na ATB, atd.
• většina vzorků je nekultivovatelných
• CCM - z katalogu; izolát - odvodit podmínky pro růst - LIŠÍ SE od přirozeného výskytu (charakter růstu i vzhled)
•  na misce/ v médiu - buňky v různé fázi růstu
-> růstová křivka (i DIAUXIE) Počet buněk/délka růstu
1 - lag fáze; 2 - fáze zrychlujícího se růstu; 3 - exponenciální fáze růstu; 4 - fáze zpomaleného růstu; 5 - stacionární fáze růstu; 6 - fáze odumírání
• Diauxie - postupné využití substrátu (např. nejdříve využije jednoduchý zdroj - glukóza->první vrchol; potom teprve nastartuje metabolizmus k využití složitějšího substrátu -laktóza ->druhý vrchol)
0      2      4      6 6
Time (hours)
• !!!!! STRIKTNÍ X TOLERANTNÍ!!!!
• nároky na 02 aerofilní
mikroaerofilní fakultativně anaerobní
anaerobní (anaerostat, vrstva parafínu, svíčka,..)
kapnofilní
aerotolerantní
• nároky na teplotu    psychrofilní (pod 2o°q
mezofilní (20-40°c)
termofilní (nad 40°C, optimum cca 50°C, extrém až 100°C)
• nároky na tlak - barofilní, barotoleratní
• nároky na redoxpotenciál, pH
• nároky na živiny
zdroj uhlíku     heterotrof - organické látky
autotrof- C02
zdroj energie   fototrof - světelná energie
organotrof- organické látky litotrof- anorganické látky
Micro-organisms
require
Source of Carbon
Source of Energy )
can be
can be
Single-celled organisms or cell clusters
Organic		COZ		Chemical		Sun-
carbon		(i norganic)		Energy i,		Light
Animals
is used by
Heterotrophs Autotrophs
Chemotrophs
Chemo- auto-lithotrophs
might be able to survive
\
is
used by
"Green algae"
Fungi
Phototrophs
Slime molds
Purple á green bacteria
ARCHEA
include
Oxidation-Reduction Reactions
have
Chlorophyll
have been discovered
J/
Deep inside Martian Crust
Deep inside Earth's Crust
in which
converts
Cyano-bacteria
		^ y	
' have		have	
Cells		Cells	
WITH		WITHOUT	
a nucleus		a nucleus	
produces
give up
1
Electrons
~—r~
shift from _L
e.g. Hydrogen
1
Green Pigment
were important to
are
are
10 to 100 pmeters in diameter
Light &COZ		Oxygen
into sugar		(02)
duri ng
Potential Energy
to
e.g. Oxygen
by aur
changed greatly in amount during
1 to 10 ^meters in diameter
Evolution of Life on Earth
Photosynthesis
Uchování- šikmé agary, misky (4°C)- vysychání, kondenzující voda - kultivace dnem vzhůru!
- glycerol, lyofilizáty (prášek vzniklý mražením kultury ve vakuu), zamražené v glycerolu
Postup
•MVyhodnocení z minulého cvičení (kontaminace ano x ne??)!!
•Aseptická práce!! Žíhat hrdla a klíčky!!! Misky otevírat co nejméně!!!
•POPSAT SI SKLO (datum jméno,kultura)
•Vyžíhat kličku a nechat zchladnout •„hádek" na šikmý agar odspodu
•Tekuté půdy-těsně nad okraj hladiny, na stěnu zkumavky, postupně vmíchat do média (osmotický šok)
•Petriho miska - křížový roztěr
(lx čistá + lx směsná kultura G+ a G-)
•Petriho miska - rozdělit na čtvrtiny -> „hádkem" od okraje ke středu
•Kultivace v termostatu 30°C po dobu 24-48 hod (do příštího cvičení se nechají při pokojové teplotě)
Křížový roztěr (Streak Plate)
Kultury ve cvičení
G-
• Escherichia coli CCM 3954
• Pseudomonas putida
• Serratia marcescens CCM 303
G+
• Kocuria rosea CCM 839
• Micrococcus luteus CCM 169
• Bacillus cereus CCM 2010
• Staphylococcus aureus SA 812
kvasinky
• Saccharomyces cerevisiae
(fakultativně anaerobní) (aerobní)
(fakultativně anaerobní)
(aerobní) (aerobní)
(fakultativně anaerobní) (fakultativně anaerobní)
(fakultativně anaerobní)