Ekotoxikologické biotesty - cvičení(Bi5620c): Jarní semester 2014
Centrum pro výzkum toxických látek v prostředí, Kamenice 753/5, Pavilon A29, 625 00 Brno
Domácí úkol 2: Chemické výpočty, ředicí řady, plánování experimentu
Cíl úkolu 1: Cílem úkolu je samostatně naplánovat experimenty dle návodů k jednotlivým úlohám (viz lab_manual.docx
a latky.xlsx) - vypočítat potřebné navážky testované látky, potřebné objemy jednotlivých koncentrací testované látky,
media, naplánovat použití rozpouštědla a postup ředění. Úkol má posílit schopnost studentů samostatně plánovat
experiment a správně provést všechny přípravné kroky včetně základních chemických výpočtů.
Vypracovat do: Všechny vypracované výpočty buď v MS Excel (doporučeno) nebo MS Word do 9.4.2014 na
rabova@recetox.muni.cz; pokud preferujete práci s tužkou a papírem, pošlete mi prosím nascanované obrázky vašich
výpočtů a nákresů nebo přineste papíry osobně do kanceláře 332 (v případě ruční práce piště prosím čitelně a přehledně,
díky)
Skupiny: práce ve dvojici, úkol odevzdává každý zvlášť (soubor může být identický)
Přesné zadání úkolu:
1. Pečlivě si prostudujte manuál k laboratorním úlohám (lab_manual.docx) a tabulku s informacemi o vaší látce
(latky_xlsx)
2. Všechny biotesty budete provádět v 5-ti bodových koncentračních řadách s ředicím faktorem (DF) 2 nebo 5.
Koncentrační rozsah určený k testování včetně všech 5 koncentračních bodů ke každé látce a organismu je
uveden v tabulce v řádcích 20, 21 a 22.
3. Vaším úkolem je dle manuálu a tabulky k jednotlivým laboratorním úlohám vypočítat následující:
• Příprava jednoho koncentrovaného zásobního roztoku vaší látky pro testování ve všech experimentech
ve vhodném rozpouštědle (destilovaná voda nebo metanol).
Vypočítejte:
A. Jaké zvolíte rozpouštědlo a proč?
B. Navážku látky
C. Objem rozpouštědla
• Příprava médií
D. Vypočítejte objemy médií potřebné pro jednotlivé testy
• Příprava ředicích řad
E. Naplánujte si, jak budete látku ředit v jednotlivých testech - vypočítejte přípravu
případných meziředění zásobního roztoku, přídavek zásobního roztoku, objem
přenášený z vyšší koncentrace do nižší, přídavek rozpouštědla (pokud je nutný)
Vždy je potřeba připravit o něco VĚTŠÍ OBJEM PRO REZERVU!!!
Ekotoxikologické biotesty - cvičení(Bi5620c): Jarní semester 2014
Centrum pro výzkum toxických látek v prostředí, Kamenice 753/5, Pavilon A29, 625 00 Brno
• Kontroly
F. Definujte, jaké kontrolní varianty jsou pro jednotlivé testy potřeba, vypočítejte
přídavek rozpouštědla do rozpouštědlové kontroly (pokud je nutný)
Vytvořte vždy přehledný plán experimentu pro každý biotest - řasy, dafnie a bakterie = takže celkem 3. Každý
tento plán by měl obsahovat body D-E-F. Body A,B,C týkající se přípravy zásobního roztoku by měly být
shodné pro všechny 3 biotesty – stačí uvést pouze jednou. Uveďte cokoli dalšího důležitého vás napadne –
správných možností je opravdu mnoho.
Při vašich úvahách se vždy snažte experimenty plánovat tak, abyste co nejméně plýtvali materiálem a chemikáliemi a
vytvářeli co nejméně odpadu. Je důležité uvažovat:
• jaký minimální objem jsme schopni nepipetovat = 2 uL
• jaké minimální množství jsme schopni navážit = 5 mg
• kolik zásobního roztoku budeme celkem potřebovat
• jaký maximální obsah rozpouštědla můžeme vnést do experimentálního systému, aby nedocházelo
k významným negativním účinkům = max 0.5% (% v/v)
• nezapomeňte zvážit rozpustnost látky ve vodě – v případě špatné rozpustnosti ve vodě, použijte jako
rozpouštědlo methanol (o adekvátní čistotě)
• některé testy mají složitý postup a dochází k sérii naředění vzorku – při přípravě vhodných
koncentracích je dobré v těchto případech postupovat pozpátku