C6200-Biochemické metody
14D_Izotopová výmĚna
Petr Zbořil

Isotopová výměna
•Dynamika molekul, interakce s okolím – uvnitř molekuly
–Výměna stejných atomů s okolím – nutnost odlišení
–V biochemii téměř výhradně H, též kovy (Zn)
–Záměna za D nebo 3H –  možnost sledování
•Rychlost mírou neuspořádanosti – vliv struktury
–Celá molekula – skupiny
–Vysoká u malých molekul x velkých
–Menší pro H ve vodíkových můstcích (a-helix)
–Vliv elektronegativity centrálního atomu skupiny
•-COOH, -SH, -OH, =NH
–Vliv T, pH aj.
–Dlouhodobý proces
–
–
•

Metody sledování
•
•Spektrální
–IR, nH  > nD – pík se posouvá, rozlišení skupiny
–NMR – D v jiné oblasti, pík H mizí
•MS
•Ostatní
–Radioisotopové
–Změna hustoty rozpouštědla (pyknometr)
–
•
•

Sledování pomocí IR
•
•
•
•
•
•
•
•Diferenční IR spektra nativního a deuteriovaného BSA
–(modrá – částečná, červeně uplná)
–+ těžší, - lehčí jádra, různá rychlost
•

Sledování pomocí NMR
•
•
•
•
•
•
•
•H-D výměna
•

Sledování pomocí MS
•
•
•Časový průběh
•H-D výměny
•u lysozymu
•pomocí ESI-MS

Izotopová výměna
•
•
•
•
•
•
•
•Dva přístupy
–Různé rychlosti výměny – vliv interakcí – konformace
•

Monitorování skládání proteinů
•
•
•
•
•
•
•
•Schema a experimentální provedení
•
•

•
•
•
•DĚkuji za pozornost
4/30/2013
Footer Text
9