Bi6120c Rostlinné explantáty           Sylabus cvičení                       Jaro 2015


01. (18. 2. 2015) Úvod do praktika: podmínky axenické kultury a požadavky na vybavení laboratoře,
typy kultur, kultivační nádoby a různé způsoby kultivace, seznámení s kultivačním systémem RITA®,
bezpečnost a organizace práce, protokoly, literatura.

02. (25. 2. 2015) Příprava živného média: různé varianty tekutého a agarem ztuženého média
(MURASHIGE – SKOOG 1962, GAMBORG a kol. 1968, atd.), příprava a rozlití do kultivačních nádob.

03. (4. 3. 2015) Nácvik práce ve sterilních podmínkách: sterilizace nástrojů, vody, nádob, živných
médií, pracovního prostoru, metody povrchové desinfekce semen, sterilní výsev semen, spor kapradin
apod. (Nicotiana, Daucus, Drosera, Linum, Phalaenopsis, Pteris).

04. (11. 3. 2015) Nácvik práce ve sterilních podmínkách: pasážování (přesazování explantátů do
čerstvého média) sterilních kultur (Drosera, Dionaea, Saintpaulia, Streptocarpus, Nephrolepis).

05. (18. 3. 2015) Mikropropagace: Odvození primární kultury bylin, různé zdroje explantátů - list,
stonek, rhizom, A. regenerace de novo: Saintpaulia, Streptocarpus, Begonia, Nephrolepis, B.
reprodukce: množení nodálními segmenty (Rosa), srovnání multiplikačního koeficientu a vitrifikace
na agarem ztužené půdě a v kultivačním systému RITA®, porovnání kultivačních podmínek za různých
režimů osvětlení (PAR, teplota) v obou kultivačních systémech.

06. (25. 3. 2015) Kalusové kultury: A. iniciace kalogeneze - založení primární kultury kambiálních
segmentů kořene (Daucus), založení kalusové kultury ze segmentů hypokotylů klíčních
rostlin.                B. udržování kalogeneze:  pasážování kalusové kultury.

07. (1. 4. 2015) Meristémové kultury: A. Izolace apikálních a axilárních meristémů bylin a dřevin
(Dianthus, Clematis, Rubus); B. indukce tuberizace na nodálních segmentech (Solanum tuberosum); C.
převod rostlin do nesterilních podmínek, aklimatizace (Saintpaulia, Streptocarpus, Nephrolepis,
Drosera, Dionaea).

08. (8. 4. 2015) A. Izolace zygotických embryí: založení kultury – desinfekce semen, izolace embryí
a jejich inokulace do živného média (Picea, Zea, Capsella). B. Kultury nižších rostlin: kultivace
dřevokazných hub (Pleurotus ostreatus, Lentinus tigrinus) – udržovací kultury a příprava očkovacího
inokula jako příklad suspenzní kultury.

09. (15. 4. 2015) Fytopatologie in vitro: certifikace čistoty kultur, test čistoty kultur Solanum
tuberosum, Saintpaulia ionantha apod. – příprava a rozlití testovacího média, inokulace explantátů.

10. (22. 4. 2015) Somatická embryogeneze: indukce přímá – apikální meristémy hrachu (Pisum),
poupata úborů cinerárie (= popelivky) (Senecio cruentus – hybrid), indukce nepřímá – kalus mrkve
(Daucus carota), srovnání produkce somatických embryí na agarem ztužené půdě a v kultivačním
systému RITA®.

11. (29. 4. 2015) Kryoprezervace: izolace axilárních meristémů brambor (Solanum tuberosum),
enkapsulace meristémů do alginátu, dehydratace alginátových perel a jejich následné rychlé
zmrazování v N[2].

12. (6. 5. 2015) Indukce haploidních rostlin: Založení prašníkové kultury, srovnání regenerační
kapacity různých linií tabáku (Nicotiana).

13. (13. 5. 2015) Exkurze do Laboratoře rostlinných explantátů Mendelovy univerzity v Brně a
Botanické zahrady a arboreta Mendelu.

14. (20. 5. 2015) Kontrola protokolů a zápočet.

             Návody ke cvičením v isu                                 změna programu vyhrazena
(podle potřeby kultur)