Eukaryotické expresní systémy
Exkurze
Aplikovaná bioinformatika, Jaro 2014
Eukaryotické expresní systémy
+ umožňují posttranslační modifikace proteinů
glykosylace, fosforylace, acetylace, ubikvitinace…
+ vyšší pravděpodobnost funkčního produktu
- buňky citlivější na manipulaci
- nižší výtěžky rekombinantních produktů
- náročnější na kultivační podmínky a čas
- dražší média a speciální vybavení
• Kvasinky, rostliny, houby, savčí buňky, hmyzí buňky, živočichové,
in vitro translace
Kvasinky
x
„humanizované“
kvasinky
Saccharomyces cerevisiae
(vystresovaná hladem)
Saccharomyces cerevisiae
+ jednoduchá transfekce a kultivace
+ snadná velkoobjemová fermentace, rychlý nárůst kultury
- nutnost často zdlouhavé optimalizace kultivačních
podmínek
- vysoká mannosylace proteinů
→ možnost využití „humanizovaných“ kmenů
• kvasinka
Kvasinkové expresní systémy
Saccharomyces cerevisiae Pichia pastoris
• plasmid nezačleňuje
do genomu
• začleňuje plasmid do genomu –
linearizace
• vysoká mannosylace
proteinů – antigennost
pro člověka
• 1/3 mannosylace oproti
S. cerevisiae
Pichia pastoris
Escherichia coli
Blueex
FLUORESCENČNÍ
MIKROSKOPIE
Kultivace ve fermentoru
Leishmania tarentolae
+ posttranslační modifikace podobné lidským
+ růst do vysokých buněčných hustot
- drahá kultivační média
- zvýšená náročnost na transfekci
- vyšší časová náročnost
• prvok
http://www.jenabioscience.com/cms/en/1/browse/1838_eukaryotic_expression_system_lexsy.html
Leishmania
tarentolae
http://www.jenabioscience.com/cms/en/1/browse/1838_eukaryotic_expression_system_lexsy.html
LEXSY Brochure:
Leishmania tarentolae
Červená fluorescence
znamená, že buňky přijaly
vektor s naším genem...
Leishmania tarentolae
Červená fluorescence
znamená, že buňky přijaly
vektor s naším genem...
Leishmania tarentolae
Tyto buňky jsou transformované vektorem a
navíc pěkně živé. Než stihnete ukončit
fluorescenční focení, utečou...Super ☺☺☺☺
Spolehlivý maskot
je nezbytný...
HEK 293
(Human Embryonic Kidney 293 cells )
Tahle není zrovna v nejlepší kondici...
HEK 293
Jsou mnohem citlivější a náročnější
na manipulaci než kvasinkové nebo
bakteriální buňky.