Úloha č.7 Mikroskopování Laboratorní technika 1 Jméno: Obor: Datum provedení: TEORETICKÝ ÚVOD Mléčné kvašení je proces anaerobního kvašení probíhající za přítomnosti bakterií mléčného kvašení. V rámci procesu mléčného kvašení bakterie vyrábějí z jednoduchých sacharidů (hlavně mono-, di- a oligosacharidů) kyselinu mléčnou. Díky bakteriím mléčného kvašení neupravované mléko během 24 hodin (při teplotě 15 - 35°C) samovolně kysne. V potravinářském průmyslu jsou např. bakterie mléčného kvašení využívány k přípravě řady mléčných výrobků (jogurty, podmáslí, zákysy, acidofilní mléko, kefír, apod.). Zástupci bakterií mléčného kvašení v mléčných výrobcích jsou např. streptokoky (Streptococcus lactis; S. termophillus), diplokoky (Diplococcus cremoris) a tyčinkovité laktobacily (Lactobacillus bulgaricus; L. jogurti; L. acidopihlus). Metoda barvení dle Grama je založená na rozdílném složení buněčné stěny grampozitivních a gram-negativních bakterií, jejímž výsledkem je rozdílná reakce některých látek v buněčné stěně bakterií. Jedna skupina bakterií obsahuje kyselinu teichovou, která po obarvení krystalovou violetí a Lugolovým roztokem vytvoří pevný barevný komplex, který se nevymývá etanolem nebo směsí etanolu a acetonu. V preparátu mají tyto bakterie barvu krystalové violeti - fialovou až modrofialovou a jsou nazývany jako grampozitivní (G+). Druhá skupina bakterií neobsahuje kyselinu teichovou v buněčné stěně, takže nedochází k tvorbě Obrázek 1. Ukázka bakterií Streptococcus lactis (vlevo a Lactobacillus acidopihlus) Úloha č.7 Mikroskopování Laboratorní technika 2 komplexu a krzstalová violeť se etanolem nebo směsí etanolu a acetonu vymývá. Po následném dobarvení preparátu barvivem karbolfuchsinem nebo O-safraninem se tyto bakterie obarví na růžovo a jsou nazývany jako gramnegativní (G-). PRAKTICKÁ ČÁST A. Příprava preparátu bakterií z jogurtu Postup práce: 1. Do kapky destilované vody na podložním sklíčku přidejte sterilním bakteriologickým očkem jogurt o velikosti špendlíkové hlavičky. 2. Pomocí bakterilogoické očka preparát rozetřete po sklíčku a následně fixujte plamenem tak, že sklíčko protáhneme plamenem. 3. Následně na preparát nakapejte barvivo methylenovou modř a barvěte po dobu 5 minut. 4. Poté barvivo opláchněte destilovanou vodou a podložní sklíčko s preparátem nechte oschnout. 5. Mikroskopujeme bez vody a krycího sklíčka pří zvětšení objektivem 60x. B. Barvení bakterií podle Grama Postup práce: 1. Připravte si preparát dle bodů 1 a 2 z předchozí úlohy. 2. Na takto připravený preparát kápněte kapku krystalové violeti a nechte působit 20 sekund. 3. Následně opláchněte krystalovou violeť pomocí Lugolova roztoku a nechte působit 20 sekund. Úloha č.7 Mikroskopování Laboratorní technika 3 4. Poté preparát odbarvujeme aceton-ethanolovou směsí tak, že odbarvovací směs lijeme opatrně na zešikmené sklíčko nad nátěr a následně dobře opláchněte destilovanou vodou. 5. Preparát dobarvěte zředěným O-safraninem po dobu 1 minuty a nakonec ho opláchněte vodou a nechte oschnout. 6. Mikroskopujeme bez vody a krycího sklíčka pří zvětšení objektivem 60x nebo 100x v olejové imerzi. Okomentujte a zakreslete pozorované tvary bakterií a uveďte, jaký typ bakterií dle Gramova barvení se v jogurtu vyskytoval.