Sledování parametrů imunitní odpovědi
Mgr. Monika Dušková, Ph.D.


Zjednodušené schéma imunitní reakce
1


Na jakých objektech pracujeme
oBuňky ex vivo
o     plná krev – profesionální fagocyty, lymfocyty, splenocyty, buňky kostní dřeně, hemolymfa
o
oTělní tekutiny: plasma, serum
o
oBezobratlí
o
oObratlovci (myši, potkani, kočky, psi, ptáci, ryby)
o

Které paramentry imunitního systému měříme
oPočty a typy krevních buněk
oFagocytóza
oProliferace (dělení) lymfocytů
oAktivita komplementového systému
oAktivita lyzozymu
oMnožství cirkulujících imunokomplexů
oHladiny sérových bílkovin
oHladiny celkových a specifických protilátek
oJaterní profil
o

Počty a typy krevních buněk
o
o                          počítání krevních elementů v Bürkerově komůrce
o
Untitled-2
•krevní diferenciál

Fagocytóza
oProfesionální fagocyty: neutrofily, monocyty
oFáze fagocytózy: chemotaxe, adheze, ingesce a degradace škodliviny
oV průběhu degradace se uplatňují reaktivní kyslíkové metabolity (RKM),neboli kyslíkové radikály,
které vytváří fagocyt za účelem rozložení škodliviny. RKM mohou napadat molekuly lipidů, proteinů i
nukleových kyselin patogena, ale hrozí i poškození vlastních tkání při nadprodukci RKM.
oStanovení RKM chemiluminiscenční reakcí:
o              více RKM = větší aktivita fagocytů
o      Měří se obvykle spontánní a aktivovaná fagocytóza – zde se suspenzi fagocytů přidá
aktivátor(=něco, co fagocyty pohlcují, např. škrobová zrna, baktérie, aktivní uhlí, složky
buněčných stěn baktérií nebo kvasinek)
•

2 3
•Zachycení, pohlcení a destrukce
•patogena ve fagocytu
•Zachycení fagocytů na endotel a
•průnik do tkáně

Výstup chemiluminiscenčního měření míry fagocytózy



Aktivita komplementového systému
oKomplement: soubor cca 30 proteinů v krevní plasmě, který se po kontaktu se škodlivinou
kaskádovitým způsobem aktivuje a produkty této aktivace přispívají ke zničení patogena, kterým může
být např. bakteriální buňka. Nejdůležitější způsob ničení je vytvoření pórů a celkové porušení
membrány patogena – jeho lýza.
o
oLze měřit buď množství jednotlivých složek komplementového systému, nebo celkovou mikrobicidní
aktivitu (pomocí chemiluminiscenční analýzy.
4
•Lytická fáze komplementové
•kaskády

Aktivita lyzozymu
oLyzozym je protein o velmi malé molekulové hmotnosti, nachází se v krevním séru a ve velkém
množství v tělních sekretech: mléko, moč, slzy, sliny, hlen. Uplatňuje při rozkladu polysacharidu
mureinu tím, že štěpí b-1,4-glykosidickou vazbu. Murein (peptidoglykan) je základní stavební
součástí buněčné stěny baktérií.
oStanovení metodou radiální imunodifúze v agarozovém gelu.
sken
•Výsledek imunodifúzního stanovení

Příklady témat realizovaných diplomových prací:
oVlivu CpG na imunitní systém myší a izolované fagocyty
oVlivu nanostříbra na fagocyty a aktivitu lyzozymu
oZměny vybraných parametrů krevních a imunitních parametrů u koček ve spojitosti s infekcí
borreliemi
oAktivita fagocytů a proliferace lymfocytů po působení látek s mikrobicidním účinkem
oVliv borreliových antigenů na rozetování erytrocytů
oVliv antikoncepce na obsah protilátek a lysozymu ve slinách
o
o
o
o

oPoužité obrátky z literatury:
o
oBartůňková, Paulík a kol.: Vyšetřovací metody v imunologii, Grada Publishing, 2005
oHořejší, Bartůňková: Základy imunologie, Triton, 2002