HPLC analýza


Roztok

Složení

Lineární gradient

Celková doba analýzy

Rychlost průtoku

počátek

konec

D

T

počátek

konec

D

A

Acetonitril:metanol:Tris HCl pufr  0,1 M (72:8:3)

100%

0%

6,5 min

7 min

0%

100%

2 min

15 min

2 ml min^-1

B

Metanol:hexan  (4:1)

0%

100%

100%

0%

Popis lineárního gradientu pro stanovení pigmentů na HPLC.


           T = doba setrvání gradientu

             D = doba změny

HPLC hardware : C[18] kolona, Separační modul 2690, Waters, USA, spektrální analýzy dat detektor
fotodiodového pole (DAD 996, Waters, USA). Roztoky a jejich gradient v průběhu separace jsou
uvedeny v tabulce. Detekce pigmentů probíhá při 440 nm. Identifikace látek pomocí standard. Analýza
(výpočet plochy peaků) pomocí softwaru Millenium.


Pozn.: Před analýzou na HPLC se musí vzorky zbavit všech nečistot, které by mohly ucpat kapiláry v
HPLC (zbytky písku, rostlinného materiálu…), proto centrifuguje 40 min, 14 tis. otáček/ min. při 4
°C.