Vliv cytokininů na obsah pigmentů u ředkvičky seté (Raphanus sativus) v podmínkách in vitro.

I. Založení experimentu


Postup:

A. Příprava 1 litru agarem ztuženého média s použitím hotové směsi

1.       Navážíme 6,7 g agaru, vsypeme do 300 ml destilované vody v SIMAX láhvi, promícháme a
necháme rozvařit v autoklávu.

2.       Do Erlenmeyerovy baňky odměříme 600 ml destilované vody.

3.       Přidáme odvážené množství média (4.4 g směsi MS média s vitamíny podle Gamborga).

4.       Přidáme 20 g sacharózy.

5.       Do 1F média přidáme růstové regulátory (BAP 1 mg/l, NAA 1 mg/l).

6.       Slijeme rozvařený agar se zahřátým roztokem v EM baňce a doplníme v odměrném válci na 1000
ml.

7.       Pomocí Phan papírků změříme pH a upravíme na 5,8 pomocí 0,1 M KOH nebo 0,1 M HCl.

8.       Médium dobře promícháme přeléváním z válce do EM baňky a rozlijeme asi po 40 ml do
kultivačních nádob.

9.        Kultivační nádoby s médiem uzavřeme vhodným uzávěrem.

10.    Sterilizujeme při 121°C v autoklávu po dobu 20 minut.

11.    Krátkodobě média uchováváme při laboratorní teplotě, při skladování po delší dobu používáme
lednici.


B. Pasážování mladých rostlinek ředkvičky na médium bez/s cytokininy

1. Desinfekce flowboxu.

2. Klíční rostlinky v Petriho miskách přeneseme do flowboxu.

3. Do kultivačních nádob s příslušným médiem (MS bez fytohormonů nebo 1F s fytohormony) přeneseme
sterilně několik rostlinek ředkvičky.

4. Kultivujeme při 16 hod. fotoperiodě, na A) normálním světle, B) velmi nízkém světle, teplotě
+-23 °C.