1
mTACSTD2
2
3
4
Spojení oligonukleotidů
Štěpení vektorů
Eluce fragmentů DNA z agarozového gelu
Ligace
Příprava kompetentních buněk E. coli
Transformace E. coli ligační směsí
Expanze klonů E. coli
Izolace plazmidové DNA
Ověření začlenění oligonukleotidu do vektoru (PCR, sekvenace)
Transfekce eukaryotických buněk
shRNA i gRNA
5
shRNA
SDS elektroforéza proteinů a imunobloting
gRNA
Selekce rezistentních buněk
Klonování rezistentních buněk metodou limitního ředění a expanze klonů
SDS elektroforéza proteinů a imunobloting
Izolace genomové DNA
PCR a klonování do sekvenačního vektoru
Sekvenace + analýza významu mutací