Transformace kompetentních buněk E. coli




1.       Na ledu pozvolna rozmražte mikrozkumavku s kompetentními buňkami, přidejte 1 ug plazmidové
DNA, promíchejte a inkubujte na ledu 30 minut.

2.       Inkubujte směs 40 s při 42^oC a poté ji umístěte na 2 minuty opět na led.

3.       Přidejte 1 ml růstového LB média a inkubujte 45 minut při 37^oC.

4.       Směs centrifugujte 5000 rpm/5 minut/ 4^oC.

5.       Odlijte supernatant vyjma cca 40 ul, ve kterých resuspendujte bakteriální sediment.

6.       Suspenzi přeneste na agarovou plotnu obsahující 50 μg/ml ampicilinu a rozetřete
bakteriologickou hokejkou.

7.       Inkubujte přes noc při 37^oC. Misky lze poté uchovat několik týdnů při 4^oC.