Jméno:

Obor:

     Datum provedení:



Teoretický Úvod

Obrázek 1:  Kys. askorbová
Stanovení koncentrace vitaminu C (kyseliny askorbové) je z klinického hlediska velmi důležité.  Pro
měření vitaminu C ve vzorcích jídla, krve nebo moči bylo vyvinuto několik analytických metod.
Jednou z těchto metod je redoxní titrace vitaminu C redoxním indikátorem 2,6 – dichloroindofenolem
(DCIP) v kyselém prostředí. Kyselina askorbová redukuje DCIP z oxidované formy (červená v kyselém
prostředí) na redukovanou (bezbarvá v kyselém prostředí).

Tento postup je jednoduchý a spočívá v prvotním naředění vzorku k. metafosforečnou a následnou
titrací DCIP. Původní roztok DCIP ve vodě je modrý, v kyselém prostředí však mění barvu na červenou
a po reakci s k. askorbovou je bezbarvý.  Vzorky k analýze často obsahují stopy interferujících
látek. Jejich vliv lze eliminovat přidáním enzymu askorbát oxidázy k titrovanému vzorku a následnou
analýzou stejného vzorku s a bez přídavku enzymu.





                             Obrázek 2: Reakce DCIP s kys. askorbovou


PRAKTICKÁ ČÁST


A.           Stanovení přesné koncentrace DCIP


Protože je roztok DCIP ve vodě nestabilní, je třeba před každým stanovením vitamínu C určit přesnou
koncentraci DCIP.


Postup práce:

1.      Na analytických vahách navažte do 1.5 ml zkumavky s přesností na 0.0001 g přibližně 5 mg
kys. askorbové a rozpusťte je v 1 ml roztoku 4% k. metafosforečné/octové.

2.      Do titrační baňky přidejte 5 ml roztoku 4% k. metafosforečné/octové a 100 ul připraveného
roztoku k. askorbové.

3.      Titrujte roztokem DCIP do trvalého růžového zabarvení. Titraci opakujte třikrát.


Výsledky:

                                           V [DCIP] (ml)

                                           V[prům] (ml)

                                       V [DCIP/1mg KA] (ml)







B.           Stanovení vitaminu C v džusu, ovoci a zelenině


Postup práce:


Stanovení vitamínu C v džusu

1.      Dobře promíchejte džus a 5 ml džusu nařeďte na objem 25 ml roztokem 4% k.
metafosforečné/octové.

2.      Přefiltrujte roztok přes filtr do kádinky.

3.      Do titrační baňky přidejte 10 ml roztoku a titrujte roztokem DCIP do trvalého růžového
zabarvení. Titraci opakujte dvakrát.

4.      Pro stanovení možných interferujících látek v džusu přidejte k 5 ml džusu 10 ul roztoku
enzymu askorbát oxidázy a inkubujte 10 minut na stole. Poté 5 ml džusu nařeďte na objem 25 ml
roztokem 4% k. metafosforečné/octové.

5.      Přefiltrujte roztok přes filtr do kádinky.

6.      Do titrační baňky přidejte 10 ml roztoku a titrujte roztokem DCIP do trvalého růžového
zabarvení. Titraci opakujte dvakrát.

7.      Stanovte koncentraci vitaminu c v džusu v mg/100 ml a okomentujte přítomnost možných
interferujících látek v džusu.



Stanovení vitaminu C v ovoci

1.        Oloupejte ovoce a s přesností na 0,1 g navažte 10 g vzorku.

2.        Vzorek rozkrájejte na kousky a rozetřete v 10 ml roztoku 4% k. metafosforečné/octové.
Extrahovanou kapalinu odlijte do 25 ml odměrné baňky.

3.        Zbylé kousky ovoce v třecí misce znovu rozetřete v 10 ml roztoku 4% k.
metafosforečné/octové a extrahovanou kapalinu odlijte znovu do 25 ml odměrné baňky.

4.        Doplňte 25 ml odměrnou baňku roztokem 4% k. metafosforečné/octové.

5.        Přefiltrujte roztok z odměrné baňky do kádinky.

6.        Do titrační baňky přidejte 10 ml roztoku a titrujte roztokem DCIP do trvalého růžového
zabarvení. Titraci opakujte dvakrát.

7.        Stanovte koncentraci vitaminu C v ovoci v mg/100 g ovoce.


Stanovení vitaminu C v zelenině před a po povaření

1.        S přesností na 0,1 g navažte dvakrát 10 g vzorku. Jeden vzorek dále zpracovávejte a druhý
dejte na 10 min vařit ve 40 ml vody.

2.        Vzorek rozkrájejte na kousky a rozetřete v 10 ml roztoku 4% k. metafosforečné/octové.
Extrahovanou kapalinu odlijte do 25 ml odměrné baňky.

3.        Zbylé kousky ovoce v třecí misce znovu rozetřete v 10 ml roztoku 4% k.
metafosforečné/octové a extrahovanou kapalinu odlijte znovu do 25 ml odměrné baňky.

4.        Doplňte 25 ml odměrnou baňku roztokem 4% k. metafosforečné/octové.

5.        Přefiltrujte roztok z odměrné baňky do kádinky.

6.        Do titrační baňky přidejte 10 ml roztoku a titrujte roztokem DCIP do trvalého růžového
zabarvení. Titraci opakujte dvakrát.

7.        Vzorek, který se 10 minut vařil ve vodě, zpracujte stejným způsobem.

8.        Následně přidejte k 5 ml vody po vaření 5 ml roztoku 4% k. metafosforečné/octové a
titrujte roztokem DCIP do trvalého růžového zabarvení. Titraci opakujte dvakrát.

9.        Stanovte koncentraci vitaminu C v zelenině v mg/100 g vzorku před a po povaření.
Okomentujte případné změny v koncentraci vitaminu C po povaření.


Výsledky:

Koncentrace vitaminu c v džusu:

                                            Druh džusu

                                           V [DCIP] (ml)

                                           V[prům] (ml)

                                        c vit C (mg/100ml)







Koncentrace vitaminu c v ovoci:

                                            Druh ovoce

                                           V [DCIP] (ml)

                                           V[prům] (ml)

                                         c vit C (mg/100g)







Koncentrace vitaminu c v zelenině:

                                           Druh zeleniny

                                           V [DCIP] (ml)

                                           V[prům] (ml)

                                         c vit C (mg/100g)







Koncentrace vitaminu c v zelenině po povaření:

                                           Druh zeleniny

                                           V [DCIP] (ml)

                                           V[prům] (ml)

                                         c vit C (mg/100g)







Koncentrace vitaminu c ve vodě po povaření zeleniny:

                                           V [DCIP] (ml)

                                           V[prům] (ml)

                                        c vit C (mg/100ml)





Okomentujte zjištěné koncentrace vitaminu C v analyzovaných vzorcích a změny v koncentraci vitaminu
C po povaření.