Téma: Základní mikrobiologický rozbor vody Cíl praktického cvičení: Proč se od sebe liší ředící řada vzorků vody povrchové a pitné? Jak se provádí stanovení celkového počtu bakterií, tedy obecného znečištění pitné a povrchové vody? Jaký typ media se používá a jaký typ kolonií se počítá? Proč se misky pro stanovení obecného znečištění kultivují při dvou různých teplotách (22°C a 37°C)? Jaké jsou indikátorové skupiny bakterií pro Základní rozbor vody? Jak se provádí stanovení indikátorové skupiny bakterií, tedy fekálního znečištění pitné a povrchové vody? Jaké konkrétní typy kultivačních medií se používají? Jmenujte některé zástupce autochtonních vodních a dále půdních bakterií, které můžeme zachytit v rozboru vody: Autochtonní vodní: Půdní Pomůcky: Zdroj pitné/povrchové vody: Pomůcky: V čem se od sebe liší postup plotnové metody u stanovení obecného znečištění vody a u stanovení indikátorových skupin? Používá se bakteriologická hokejka v obou postupech? Princip přípravy plotnové metody pro očkování na neselektivní půdu TYEA = princip stanovení obecného znečištění vody: Princip přípravy plotnové metody u všech tří typů selektivně diagnostických medií pro stanovení indikátorové skupiny fekálních koliformních enterobakterií a pro stanovení enterokoků: Jaký typ kolonií se počítá na ENDO agaru? Při jaké teplotě probíhá kultivace? Jaký typ kolonií se počítá na MFC agaru? Při jaké teplotě probíhá kultivace? Jaký typ kolonií jakého rodu se počítá na SB agaru? Při jaké teplotě probíhá kultivace? Závěr: posouzení vhodnosti pitné vody pro konzumaci; (posouzení vhodnosti povrchové vody ke koupání viz níže): Voda pro hromadné zásobování (více než 100 osob) nesmí obsahovat více než: 200 psychrofilních a 20 mezofilních bakterií na 1 ml; 0 koliformních či enterokoků na 100 ml Voda pro individuální zásobování (studny; méně než 100 osob) nesmí obsahovat více než: 500 psychrofilních a 100 mezofilních bakterií na 1 ml; 0 koliformních či enterokoků v 10 ml Vyhodnocení: a) stanovení obecného bakteriálního znečištění vody: Tab. 1: PSYCHROFILNÍ BAKTERIE (22 °C) ředění počet kolonií 1. miska počet kolonií 2. miska CFU/ml = (a+b)/2 . 10^+X . 1 limit CFU/ml průměr z obou ředění: Tab. 1: MEZOFILNÍ BAKTERIE (37 °C) ředění počet kolonií 1. miska počet kolonií 2. miska CFU/ml = (a+b)/2 . 10^+X . 1 limit CFU/ml b) stanovení fekálního znečištění vody: Výpočet CFU/ml neředěný vzorek: CFU/ml = (průměrný počet kolonií ze 2 misek) x (ředící koeficient 10) ředění 10-1: CFU/ml = (průměrný počet kolonií ze 2 misek) x (diluční faktor 10) x (ředící koeficient 10) Ředění 10-2: CFU/ml = (průměrný počet kolonií ze 2 misek) x (diluční faktor 100) x (ředící koeficient 10) Tab. 3: ENDŮV AGAR (37 °C) Na tomto selektivním mediu jsme odečítali výskyt E. coli (kolonie s kovovým leskem) a rudě červené kolonie laktóza-pozitivních enterobakterií (koliformní bakterie). Růžové či průhledné kolonie jsme nepočítali, protože značí laktóza negativní rody. Ve výpočtu - 10^+X - X znamená kladný exponent ředění ředění počet kolonií 1. miska počet kolonií 2. miska CFU/ml = (a+b)/2 . 10^+X . 10 limit CFU/ml (pitná voda) průměr z obou ředění: Tab. 4: mFC AGAR (44 °C) Kolonie laktóza-pozitivních bakterií, které jsme na tomto mediu počítali, jsou fialové nebo tmavě modré. Nepočítali jsme světle růžové ani šedé. ředění počet kolonií 1. miska počet kolonií 2. miska CFU/ml = (a+b)/2 . 10^+X. 10 limit CFU/ml (pitná voda) průměr z obou ředění: SPOLEČNÉ STANOVENÍ ENTEROKOKŮ VE VODĚ FILTROVÁNÍM PŘES WHATMANNŮV FILTR: Přes filtr jsme přefiltrovali 100 ml vody ze zdroje: _________________ a tento filtr jsme do druhého dne, kultivovali při 44 °C. Napočítali jsme ____________ tmavě červených kolonií. CFU/100 ml =