Sledování parametrů
imunitní odpovědi
MVDr. Mgr. Monika Dušková, Ph.D.
Zjednodušené schéma imunitní reakce
Na jakých objektech pracujeme
 Buňky ex vivo
plná krev – profesionální fagocyty, lymfocyty,
splenocyty, buňky kostní dřeně, hemolymfa
 Tělní tekutiny: plasma, serum
 Bezobratlí
 Obratlovci (myši, potkani, kočky, psi, ptáci, ryby)
Které paramentry imunitního
systému měříme
 Počty a typy krevních buněk
 Fagocytóza
 Proliferace (dělení) lymfocytů
 Aktivita komplementového systému
 Aktivita lyzozymu
 Množství cirkulujících imunokomplexů
 Hladiny sérových bílkovin
 Hladiny celkových a specifických protilátek
 Jaterní profil
Počty a typy krevních buněk
počítání krevních elementů v Bürkerově komůrce
krevní diferenciál
Fagocytóza
 Profesionální fagocyty: neutrofily, monocyty
 Fáze fagocytózy: chemotaxe, adheze, ingesce a degradace
škodliviny
 V průběhu degradace se uplatňují reaktivní kyslíkové
metabolity (RKM),neboli kyslíkové radikály, které vytváří
fagocyt za účelem rozložení škodliviny. RKM mohou napadat
molekuly lipidů, proteinů i nukleových kyselin patogena, ale
hrozí i poškození vlastních tkání při nadprodukci RKM.
 Stanovení RKM chemiluminiscenční reakcí:
více RKM = větší aktivita fagocytů
Měří se obvykle spontánní a aktivovaná fagocytóza – zde se
suspenzi fagocytů přidá aktivátor(=něco, co fagocyty pohlcují,
např. škrobová zrna, baktérie, aktivní uhlí, složky buněčných
stěn baktérií nebo kvasinek)
Zachycení, pohlcení a destrukce
patogena ve fagocytu
Zachycení fagocytů na endotel a
průnik do tkáně
Výstup chemiluminiscenčního měření
míry fagocytózy
0
20
40
60
80
100
120
140
Chemiluminiscence[RLU/103leukocytů]
Čas [s]
Příklad kinetického grafu chemiluminiscenční reakce
Aktivovaná CL
SpontánníCL
Aktivita komplementového systému
 Komplement: soubor cca 30 proteinů
v krevní plasmě, který se po
kontaktu se škodlivinou
kaskádovitým způsobem aktivuje a
produkty této aktivace přispívají ke
zničení patogena, kterým může být
např. bakteriální buňka.
Nejdůležitější způsob ničení je
vytvoření pórů a celkové porušení
membrány patogena – jeho lýza.
 Lze měřit buď množství jednotlivých
složek komplementového systému,
nebo celkovou mikrobicidní aktivitu
(pomocí chemiluminiscenční analýzy.
Lytická fáze komplementové
kaskády
Aktivita lyzozymu
 Lyzozym je protein o velmi malé molekulové hmotnosti,
nachází se v krevním séru a ve velkém množství v tělních
sekretech: mléko, moč, slzy, sliny, hlen. Uplatňuje při rozkladu
polysacharidu mureinu tím, že štěpí -1,4-glykosidickou vazbu.
Murein (peptidoglykan) je základní stavební součástí buněčné
stěny baktérií.
 Stanovení metodou radiální imunodifúze v agarozovém gelu.
Výsledek imunodifúzního stanovení
Příklady témat realizovaných
diplomových prací:
 Vlivu CpG na imunitní systém myší a izolované fagocyty
 Vlivu nanostříbra na fagocyty a aktivitu lyzozymu
 Změny vybraných parametrů krevních a imunitních
parametrů u koček ve spojitosti s infekcí borreliemi
 Aktivita fagocytů a proliferace lymfocytů po působení
látek s mikrobicidním účinkem
 Vliv borreliových antigenů na rozetování erytrocytů
 Vliv antikoncepce na obsah protilátek a lysozymu ve
slinách
Použité obrátky z literatury:
Bartůňková, Paulík a kol.: Vyšetřovací metody v imunologii, Grada
Publishing, 2005
Hořejší, Bartůňková: Základy imunologie, Triton, 2002