Imunologie hmyzu – hemocyty


 1. Úvod – hemocyty, typy, funkce, sesilní x volné, odlišné zastoupení během vývoje, infekce atd.


 2. Odběr hemolymfy larev VII. instaru zavíječe voskového Galleria mellonella a larev III. instaru
Drosophila melanogaster, fenylthiomočovina jako antikoagulant, naředění vzorku 20x v pufru
(fosfátový pufr, pH=7,0), fotodokumentace (Olympus SZX9 + Nikon D3100).


 3. Počítání hemocytů v Bürkerově komůrce, porovnání s počtem lidských krvinek:

Počet buněk v 1 mm^3 (µl) suspenze lze určit vzorcem:

b...počet buněk v 1 mm^3

n...celkový počet napočítaných buněk

c...počet čtverců ve kterých se počítalo (nejčastěji 25 nebo 50)

v...plocha použitého čtverce (malý nebo velký)

h...hloubka komůrky

z...použité ředění suspenze (uvádí se kolikrát byla suspenze ředěna např. 20x, tedy 20)


Hloubka: 0,1 mm

            Plocha malého čtverce: 1/400 mm^2 = 0,0025 mm^2

            Plocha velkého čtverce: 1/25 mm^2 = 0,04 mm^2


            Počítáme ve 20 velkých čtvercích.


            Počet hemocytů G. mellonella uvádí Chapman1998: 4 mil./celá larva VII. instaru,

            Shapiro 1968: průměr ± SD: 33693 ± 3300 v mm^3

^

            Počet hemocytů D. suzukii: Kacszoh et al. 2012: 150-200 /larvu III. instaru, která
obsahuje cca 2.5 µl hemolymfy


            Lidské erytrocyty: 3-6.10^6/ mm^3

            Lidské leukocyty:  4-9.10^3/ mm^3


 4. Specifické barvení hemocytů G. mellonella 0.05% akridinovou oranží (granulocyty),
fotodokumentace (Olympus BX43 + kamera Infinity 2, Quick Photo Micro software).


 5. Adherence plasmatocytů G. mellonella pomocí přidaných vápenatých iontů (CaCl[2, ]0.022g v 10 ml
H[2]O) fotodokumentace.


 6. Mutace D. melanogaster Bc „black cells“ – nefunkční crystal cells.


 7. Hemocyty D. melanogaster značené RFP (hml-Gal4;UAS-RFP), fotodokumentace.