Drosophila melanogaster – nematode assay


1.      Příprava suspenze invazních stádií (IJs) entomopatogenních hlístic H. bacteriophora GFP o
koncentraci 25 a 50 IJs/10µl. Počítání na parafilmu, zakoncentrování/naředění suspenze, odlišení
živé/mrtvé.


2.      Příprava larev D. melanogaster pro nákazu – w^1118, případně BcImd, promytí larev
z potravy.


3.      Nasazení 96 jamkových desek pro nákazu larev D.m. EPN, jedna skupina je 48 larev (polovina
desky), několik opakování, dvě koncentrace IJs, v každé jamce je 10µl suspense IJs, jedna larva D.
melanogaster, kousek papírového kapesníčku, zaparafilmováno, fotodokumentace Olympus SZX9 + Nikon
D3100. Odečet experimentu (mortalita larev) bude po 48 hodinách inkubace v 29°C.


4.      Připrava vials s potravou – RNAi responder linie (pro vizualizaci GFP) a driver linie
(ActGal4) na příští cvičení (virgins ActGal4 a samci RNAi-GFP), za 4 dny budou přehozeny na jinou
potravu s kvasnicemi.