Metodický návod
1
♪
1. Paralelní práce s více kyvetami
Při měření absorpce více roztoků bývá výhodné používat více kyvet současně.
Tímto docilujeme urychlení práce, avšak zvyšujeme pravděpodobnost hrubé
chyby způsobené obsluhou při
neúmyslné záměně kyvet.
Při práci s více kyvetami je třeba mít na
paměti tyto faktory:
1. I nové kyvety mohou vykazovat
různou absorbanci. Odchylky
zejména vznikají stárnutím,
poškrábáním, ulpěním nečistot na
stěnách, atd.
2. Má-li přístroj jednu referenční a více
nežli jednu měrnou pozici, nelze při
měření vkládat kyvety náhodně.
Důvodem jsou možné rozdíly
v optické dráze a zastínění detektoru
paprsku pro různé měrné pozice.
3. I kyvety se čtvercovým půdorysem
musíme vkládat vždy stejnou stranou
do dráhy paprsku (přední strana bývá značena šipkou, boční strany bývají
matné).
Správná laboratorní praxe pro paralelní měření n roztoků proto spočívá v tomto
postupu:
1. PŘÍPRAVA KYVET
• Pozice v spektrofotometru si označíme písmenem R (pro základní referenci) a
číslicemi 1 až n (pro měrné pozice). Jsou-li již pozice na přístroji označeny,
převezmeme toto značení k následnému značení kyvet.
• Označíme si kyvety. Vybereme jednu z nich pro referenční roztok (obvykle tu,
která je vizuálně nejčistší nebo nová) a na její levou stranu, kterou nebude
procházet paprsek, napíšeme permanentním popisovačem písmeno „R“
(preferujeme však značení pozic na přístroji). Ostatní kyvety označíme stejně,
jako jsou značeny měrné pozice (např. 1 až n).
2. MĚŘENÍ ABSORBANCE KYVET
• Všechny kyvety (pokud nejsou nové) několikrát vypláchneme referenčním
roztokem (obvykle vodou). Při posledním plnění v nich referenční roztok
ponecháme do výšky, která je předepsaná v návodu k přístroji (obvykle 2/3).
Očistíme a osušíme vnější stěny kyvet tamponem, který nezanechává vlákna.
• Na pravou boční stěnu referenční kyvety s obsahem napíšeme hodnotu
absorbance 0.0 (nula) a umístíme ji do pozice „R“ v přístroji. Ostatní kyvety
umístíme také. Označení měrných pozic a kyvet musí být ve shodě! Přední
strana kyvety směrem k zdroji paprsku! Postupně změříme absorbanci
měrných kyvet i s referenčním roztokem a na jejich pravou stěnu si napíšeme
tuto hodnotu absorbance.
3. MĚŘENÍ VZORKŮ

OBR. 1: Spektrofotometr Jenway 6300.
Měřící komora se 4 pozicemi pro kyvety.

Metodický návod
2
♪
• V referenční pozici přístroje si ponecháme základní referenční kyvetu
s referenčním vzorkem (vodou). Do měrných kyvet nalijeme vzorky k měření
absorbance a umístíme je do měrných pozic přístroje ve shodě s jejich
značením.
• Provedeme měření absorbance dle návodu k přístroji (tj. do dráhy paprsku
umísťujeme příslušnou kyvetu s referencí, nebo vzorkem). Vždy musí být
kyveta na místě ve shodě se značením! Hodnoty absorbance si zapisujeme
do laboratorního deníku.
• Měření vzorků dle potřeby opakujeme (například po časových intervalech). Při
manipulaci vždy dbáme na shodu ve značení měrné pozice přístroje a značení
kyvety.
• Po skončení měření své záznamy na bocích kyvet smažeme lihem.
VYHODNOCENÍ: Vytvoříme TABULKU 1 obsahující sloupec s označením kyvet
(„R,1,…,n“) a sloupec s jejich referenční absorbancí (tj. pro základní referenci
„R“ bude uvedena absorbance „0,0“, ostatní kyvety mohou obsahovat nenulovou
hodnotu, obvykle k nule blízkou).
Vytvoříme nekorigovanou TABULKU 2 obsahující v záhlaví sloupců označení kyvety a
ve sloupcích pod tím absorbance vzorků měřených v kyvetách. Vytvoříme
korigovanou TABULKU 3 obsahující v záhlaví sloupců označení kyvety a ve sloupcích
absorbance vzorků z tabulky 2 po odpočtu korekce dle tabulky 1.
