B. Příprava 1.2 mM roztoku hexakyanoželezitanu draselného A420 c (mmol.l-1) ε (l.mol-1.cm-1) zředěný roztok K3[Fe(CN)]6 "1,13" "C. Použití pipet s nastavitelným objemem 1-10ul, 10-100 ul a 100-1000 ul" zkumavka pipetovaný objem A420 c (mmol.l-1) K3[Fe(CN)6] Ø c (mmol.l-1) s 30 mM K3[Fe(CN)6] [ml] destilovaná voda [ml] 1 5 995 "0,14" 2 5 995 "0,14" 3 5 995 "0,15" 4 10 990 "0,28" 5 10 990 "0,29" 6 10 990 "0,31" 7 15 985 "0,45" 8 15 985 "0,43" 9 15 985 "0,41" 10 20 980 "0,58" 11 20 980 "0,59" 12 20 980 "0,52" zkumavka pipetovaný objem A420 c (mmol.l-1) K3[Fe(CN)6] Ø c (mmol.l-1) s 3 mM K3[Fe(CN)6] [ml] destilovaná voda [ml] 1 50 950 "0,11" 2 50 950 "0,14" 3 50 950 "0,11" 4 100 900 "0,26" 5 100 900 "0,27" 6 100 900 "0,27" 7 150 850 "0,41" 8 150 850 "0,41" 9 150 850 "0,41" 10 200 800 "0,57" 11 200 800 "0,57" 12 200 800 "0,57" zkumavka pipetovaný objem A420 c (mmol.l-1) K3[Fe(CN)6] Ø c (mmol.l-1) s "1,2 mM K3[Fe(CN)6] [ml]" destilovaná voda [ml] 1 150 850 "0,12" 2 150 850 "0,12" 3 150 850 "0,13" 4 300 700 "0,31" 5 300 700 "0,32" 6 300 700 "0,38" 7 450 550 "0,52" 8 450 550 "0,50" 9 450 550 "0,50" 10 600 400 "0,69" 11 600 400 "0,70" 12 600 400 "0,70" D. Stanovení hustoty kapalné látky m1 (g) m2 (g) m3 (g) ρk (kg.m-3) Kapalinaa "773,746" "174,449" "154,364" E. Kalibrace Pipet Objem (ul) mvody/mg Vi vody (ul) `V (ul) Vi -`V (ul) (Vi -`V)2 s Pipeta 10-100 ul 10 "8,3" "8,3" "8,3" 50 "47,6" "47,6" "48,8" 100 "97,2" "98,7" "98,2" Objem (ul) mvody/mg Vi vody (ul) `V (ul) Vi -`V (ul) (Vi -`V)2 s Pipeta 100-1000 ul 100 "98,5" "98,5" "97,1" 500 "497,8" "492,9" "498,0" 1000 "995,4" "989,4" "988,7" ##### Sheet/List 2 ##### A. Stanovení koncentrace HCl titrací roztokem NaOH VNaOH (ml) Vprům (ml) cHCl (M) "6,6" "5,9" "4,7" B. Stanovení disociační konstanty TRIS (tris(hydroxymetyl)aminometan) Titrační křivka TRIS V HCl (ml) pH 0 10.06 1 9.29 2 8.97 3 8.77 4 8.6 5 8.45 6 8.32 7 8.18 8 8.04 9 7.9 10 7.75 11 7.56 12 7.31 13 6.78 14 2.96 15 2.44 16 2.21 17 2.09 18 1.98 19 1.92 20 1.84 21 1.78 22 1.74 23 1.69 24 1.65 cHCl (mM) Vekv (ml) cTRIS (mM) pKA TRIS C. Stanovení disociačních konstanty kyseliny fosforečné Titrační křivka k. fosforečné V NaOH (ml) pH 0 2.3 0.5 2.37 1 2.49 1.5 2.69 2 3.14 2.5 5.87 3 6.59 3.5 6.99 4 7.32 4.5 7.83 5 9.71 5.5 10.79 6 11.18 6.5 11.4 7 11.55 7.5 11.63 8 11.72 8.5 11.79 9 11.84 9.5 11.89 10 11.93 10.5 11.98 11 12.01 11.5 12.04 12 12.07 12.5 12.1 13 12.12 13.5 12.15 14 12.16 14.5 12.19 15 12.21 ##### Sheet/List 3 ##### A. Stanovení přesné koncentrace DCIP V DCIP (ml) Vprům (ml) V DCIP/1mg KA (ml) "4,7" "4,4" "4,5" "B. Stanovení vitaminu C v džusu, ovoci a zelenině" Koncentrace vitaminu c v džusu: Druh džusu V DCIP (ml) Vprům (ml) c vit C (mg/100ml) Jablečný "0,57" "0,55" Koncentrace vitaminu c v ovoci: Druh ovoce V DCIP (ml) Vprům (ml) c vit C (mg/100g) Citron "7,1" "8,2" Koncentrace vitaminu c v zelenině: Druh zeleniny V DCIP (ml) Vprům (ml) c vit C (mg/100g) Brambora "1,17" "1,3" Koncentrace vitaminu c v zelenině po povaření: Druh zeleniny V DCIP (ml) Vprům (ml) c vit C (mg/100g) Brambora "0,9" "0,8" Koncentrace vitaminu c ve vodě po povaření zeleniny: V DCIP (ml) Vprům (ml) c vit C (mg/100ml) "0,55" "0,51" ##### Sheet/List 4 ##### A. Dialýza A420 c (mmol.l-1) K3[Fe(CN)]6 ε "0,168" Čas [min] A420 0 0 15 "0,035" 30 "0,054" 45 "0,069" 60 "0,068" 75 "0,103" 90 "0,116" 105 "0,121" 120 "0,122" C. Gelová chromatografie Frakce A (590 nm) 1 "0,029" 2 "0,021" 3 "0,017" 4 "0,025" 5 "0,042" 6 "0,055" 7 "0,385" 8 "0,361" 9 "0,133" 10 "0,064" 11 "0,028" 12 "0,039" 13 "0,043" 14 "0,045" ##### Sheet/List 5 ##### A. Stanovení koncentrace buněk v suspenzi Počet buněk P. pastoris Čtverec 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Průměr 1 x ředěné 215 352 257 268 265 237 251 293 241 224 10 x ředěné 26 30 28 42 45 38 71 43 16 31 B. Hodnocení viability buněk trypanovou modří Stanovení viability suspenze P. pastoris Čtverec 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Průměr Živé buňky 18 20 10 38 24 43 39 22 26 16 Mrtvé buňky 0 1 0 3 0 2 6 0 1 0 Viabilita (%) Stanovení viability suspenze P. pastoris po inkubaci při 90°C Čtverec 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Průměr Živé buňky 68 87 30 27 24 43 37 65 43 14 Mrtvé buňky 174 38 171 114 123 59 66 51 81 35 Viabilita (%) ##### Sheet/List 6 ##### A. Stanovení koncentrace proteinů z absorpce UV světla A280 A260 c (mg/ml) dle rovnice (1) c (mg/ml) dle rovnice (2) Vzorek 1 "0,606" "0,397" Vzorek 2 "1,080" "0,656" B. Stanovení koncentrace proteinů Lowryho metodou Výsledná c ovalbuminu (mg.ml-1) A750 1 2 Průměr 0 "0,14" "0,15" 16 "0,16" "0,17" 32 "0,22" "0,19" 48 "0,31" "0,29" 64 "0,34" "0,35" 80 "0,38" "0,40" Vzorek 1 "0,14" "0,19" Vzorek 2 "0,26" "0,29" C. Stanovení koncentrace proteinů metodou dle Bradforda Výsledná koncentrace ovalbuminu (mg.ml-1) A595 1 2 Průměr 0 "0,34" "0,36" 4 "0,50" "0,45" 8 "0,47" "0,6" 12 "0,72" "0,74" 16 "0,72" "0,74" 20 "0,77" "0,78" 40 "0,99" "1,07" Vzorek 1 "1,00" "1,04" Vzorek 2 "0,56" "0,56"