6. SPEKTROFOTOMETRIE


 Metoda A


1)    Časová závislost  A

·         Měření A  =  f(t) při 510 nm; 25 ml odměrná baňka

·         5 ml standardního roztoku A + 3 ml CH[3]COONa (na pH 3,5) + 1 ml 10% hydroxylamin
hydrochloridu + 1 ml 0,5 % 1,10-fenanthrolinu, doplnit po značku

                                              t (min)

                                                                                                      A

                                                                                                        t (min)

                                                                                                                  A

                                                 0

                                                                                                    0,271

                                                                                                          30

                                                                                                                0,343

                                                 5

                                                                                                    0,283

                                                                                                          35

                                                                                                                0,346

                                                10

                                                                                                    0,301

                                                                                                          40

                                                                                                                0,351

                                                15

                                                                                                    0,322

                                                                                                          45

                                                                                                                0,355

                                                20

                                                                                                    0,331

                                                                                                          50

                                                                                                                0,358

                                                25

                                                                                                    0,338

                                                                                                          55

                                                                                                                0,359











2)    Výběr spektra A (v rozsahu 350 – 600 nm po 10 m)

·         1 cm kyveta, BLANK = destilovaná voda; graf A = f(λ) → odečíst max. vlnovou délku


                                              λ (nm)

                                                 A

                                              λ (nm)

                                                 A

                                              λ (nm)

                                                 A

                                                350

                                               0,148

                                                470

                                               0,391

                                                590

                                               0,027

                                                360

                                               0,084

                                                480

                                               0,410

                                                600

                                               0,019

                                                370

                                               0,059

                                                490

                                               0,416



                                                380

                                               0,075

                                                500

                                               0,428



                                                390

                                               0,110

                                                510

                                               0,445



                                                400

                                               0,155

                                                520

                                               0,423



                                                410

                                               0,202

                                                530

                                               0,344



                                                420

                                               0,244

                                                540

                                               0,232



                                                430

                                               0,278

                                                550

                                               0,143



                                                440

                                               0,307

                                                560

                                               0,086



                                                450

                                               0,328

                                                570

                                               0,054



                                                460

                                               0,356

                                                580

                                               0,039




3)    Kalibrační křivka A

·         A  =  f©, 1 cm kyveta, BLANK = destilovaná voda

·         1 – 10 ml ml standardního roztoku A + 3 ml CH3COONa (na pH 3,5) + 1 ml 10 % hydroxylamin
hydrochloridu + 1 ml 0,5 % 1,10-fenanthrolinu, doplnit po značku



                                                č.

                                              V [ml]

                                              m [mg]

                                                 n

                                              [mmol]

                                           c[Fe][mol/l]

                                                 A

                                                 e

                                             teor.abs.

                                               A^t.

                                             λ = 510nm


                                           1 ml = 10 ug

                                              n = m/M



                                            e = A/c[Fe]

                                            A^t = e*. C

                                                 1

                                                 1




                                               0,081



                                                 2

                                                 2




                                               0,160



                                                 3

                                                 3




                                               0,242



                                                 4

                                                 4




                                               0,323



                                                 5

                                                 5




                                               0,397



                                                 6

                                                 6




                                               0,484



                                                 7

                                                 7




                                               0,551



                                                 8

                                                 8




                                               0,627



                                                 9

                                                 9




                                               0,719



                                                10

                                                10




                                               0,784


















                          e* =



4)    Neznámý vzorek A

·         100 ml odměrná baňka → vzorek doplnit na 100 ml, odsud pipetovat  10 ml do tří 25 ml
odměrných baněk

·         přidat   3 ml CH[3]COONa (na pH 3,5) + 1 ml 10 % hydroxylamin hydrochloridu + 1 ml 0,5 %
1,10-fenanthrolinu, doplnit po rysku


č.

                                                                                                   A

                                                 1

                                                                                                 0,200

                                                 2

                                                                                                 0,198

                                                 3

                                                                                                 0,199


Metoda B


1)    Časová závislost  B

·         Měření A  =  f(t) při 420 nm; 50 ml odměrná baňka

·         2 ml standardního roztoku B + 5 ml 10 % kyseliny sulfosalicylové + 10 ml 10 % amoniaku,
doplnit po rysku


                                              t (min)

                                                 A

                                              t (min)

                                                 A

                                              t (min)

                                                 A

                                                 0

                                               0,202

                                                20

                                               0,207

                                                40

                                               0,208

                                                 5

                                               0,203

                                                25

                                               0,207

                                                45

                                               0,208

                                                10

                                               0,205

                                                30

                                               0,208

                                                50

                                               0,208

                                                15

                                               0,206

                                                35

                                               0,208

                                                55

                                               0,208


2)    Výběr spektra B (v rozsahu 370 – 560 nm po 10 nm)

·         1 cm kyveta, BLANK = destilovaná voda


                                              λ (nm)

                                                 A

                                              λ (nm)

                                                 A

                                                370

                                               0,241

                                                490

                                               0,159

                                                380

                                               0,265

                                                500

                                               0,119

                                                390

                                               0,314

                                                510

                                               0,088

                                                400

                                               0,362

                                                520

                                               0,062

                                                410

                                               0,399

                                                530

                                               0,043

                                                420

                                               0,418

                                                540

                                               0,031

                                                430

                                               0,416

                                                550

                                               0,025

                                                440

                                               0,394

                                                560

                                               0,015

                                                450

                                               0,357

                                                460

                                               0,308

                                                470

                                               0,258

                                                480

                                               0,206


3)    Kalibrační křivka B

·         A  =  f(c), 1 cm kyveta, BLANK = destilovaná voda

·         0,5 - 3 ml ml standardního roztoku B + 5 ml 10 % kyseliny sulfosalicylové + 10 ml10 %
amoniaku, doplnit po rysku


                                                č.

                                              V [ml]

                                              m [mg]

                                                 n

                                              [mmol]

                                           c[Fe][mol/l]

                                                 A

                                                 e

                                             teor.abs.

                                                A^t

                                             λ = 420nm


                                           1 ml = 100 ug

                                              n = m/M



                                            e = A/c[Fe]

                                            A^t = e*. c

                                                 1

                                                0,5




                                               0,081



                                                 2

                                                 1




                                               0,160



                                                 3

                                                1,5




                                               0,242



                                                 4

                                                 2




                                               0,323



                                                 5

                                                2,5




                                               0,397



                                                 6

                                                 3




                                               0,484




                     e* =



4)    Neznámý vzorek B

·         50 ml odměrná baňka

·         Ke vzorku v odm. baňce přidat 5 ml 10 % kyseliny sulfosalicylové, 10 ml 10 % amoniaku,
doplnit po rysku


č.

                                                                                                   A

                                                 1

                                                                                                 0,532