Pracovní list

Tento pracovní list je nutné vypracovat nejpozději týden před samotným cvičením, bez něj není možné
cvičení absolvovat. Opravy a nejasnosti budou řešeny individuálně emailem. Jako podklady mohou
sloužit materiály z přednášek, významnější podíl však bude mít využívání volně dostupných
internetových či knižních zdrojů.

Otázky odpovídejte stručně, orientujte se podle velikosti pole pro odpověď, které by mělo být
dostatečné.

Napište 4–5 příkladů využití purifikovaných proteinů:

Vyjmenujte základní využívané metody purifikace proteinů a jejich stručnou charakterizaci – k jaké
interakci dochází, podle čeho se proteiny dělí (velikost, náboj, afinita, konformace apod.),
typické využití metody (velký objem vzorku, nižší výsledná čistota vs. malý objem vzorku a velmi
vysoká výsledná čistota purifikovaného proteinu):

Textové pole: Indukční činidlo Textové pole: Selekční marker Textové pole: Lyze buněk Textové pole:
Transformace Textové pole: Heterologní exprese Textové pole: PCR Textové pole: Barvení buněk
Textové pole: Plasmid Textové pole: Typizace bakteriálního kmene Co předchází purifikaci proteinů?
Napište 2–3 věty; pro inspiraci můžete použít některé z pojmů níže (nesnažte se využít všechny!).

Textové pole: Funkční assay Textové pole: Kultivace Textové pole: Elektroforéza Textové pole:
Specifická enzymatická aktivita Textové pole: Centrifugace Textové pole: Klonování Textové pole:
Sekvenování

Návrh metody

Toto je hlavní část pracovního listu. Popište, jakým způsobem byste se pokusili získat zelený
fluorescenční protein (GFP = green fluorescent protein) v co nejvyšší čistotě. Vycházejte ze
schématu vpravo. Stručně popište, jak byste kultivovali expresní buňky E. coli BL21(DE3) obsahující
plasmid pET–21b(+)_GFP. Uveďte název zvolené metody, popř. její princip, pokud není dostatečně
popsán výše. Uveďte seznam potřebného materiálu (specifické pro danou metodu, neuvádějte materiál
typu zkumavky, pipety, centrifuga apod.) a navrhněte složení pufrů (zaměřte se na funkci
jednotlivých složek spíše než na jejich přesné koncentrace).