Výsledky funkčních testů na MPA plotnách:


Úloha č. 1 – klonování genu pro endolyzin do pEt28


Na selekčních plotnách vidíme v podobě čárek narostlou buněčnou kulturu expresního kmene E. coli
BL21 DE (pET28::endo). Po ošetření chloroformem dojde k usmrcení buněk a vylití buněčného obsahu
včetně exprimovaného endolyzinu do okolí. Plotna byla přelita vodním agarem s obsahem usmrcených
buněk S. aureus. Uvolněný endolyzin lyzuje buněčnou stěnu S. aureus, což se projeví jako projasnění
v okolí „čárek“. Na kontrolní misce bez vektoru toto nepozorujeme.




















Úloha č. 2 – Cas10, inaktivace fágové DNA pomocí CRISPR

Na MPA plotnách je vysetý bakteriální kmen s připraveným vektorem pCN51_gRNA_812, který cílí na DNA
fága 812 a tedy navozuje rezistenci k tomuto fágu.

Na kontrolních miskách s kmenem RN4220 bez vektoru vidíme zony lyze typické pro infekci fágem 812.

Kontrolně byl vyset také fág 812a, který by měl lyzovat i kmen s vektorem (spacer na něj necílí).

Textové pole: Chybí zóny lyze v ředění lyzátu na plotně s vektorem. Textové pole: Citlivý kontrolní
fág 812a