Experimentální embryologie
Bi1130
Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 2
Mgr. Jakub Harnoš, Ph.D.
JS 2023 5.5.2023
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 22
Osnova
̶ (Meziproteinové) interakce (PPI)
Made by James Harnos
̶ Proteiny
̶ Analýza proteinů
(lokalizace, konformace, aktivita)
̶ Post-translační modifikace (PTM)
Dnes: další PTM, techniky studujících PPI a několik příkladů z Vývoj. biologie
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 23
Posttranslační modifikace proteinů
https://www.rockland.com/
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 24
Posttranslační modifikace proteinů
̶ Modifikace postranních řetězců aminokyselin v proteinech (pomocí enzymů)
̶ Velká diverzita proteomu
̶ Význam mj. pro diagnostiku chorob:
Co jsou PTM a jaká je jejich funkce při embryogenezi?
a) Fosforylace
̶ První popsaná PTM proteinů (Eugene P. Kennedy, 1954)
̶ Reverzibilní (enzymy: fosfatázy)
̶ Připojení malé anorganické skupiny PO4
3̶
Aminokyseliny: Ser, Thr, Tyr
̶ Enzymy: Kinázy + ATP (subs. a zároveň zdroj E)
̶ Funkce: regulace + signalizace (sign. dráhy)
Posttranslační modifikace proteinů
Molekula ATP
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 25
a) Fosforylace
̶ Př. DVL + CK1 (viz minule)
̶ Př. beta-katenin (fosforylace mění konformaci)
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 26
www.wikipedia.org
Made by James Harnos
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii7
Gao et al., 2011.
Wnt signaling gradients establish planar cell polarity by
inducing Vangl2 phosphorylation through Ror2.
Dev Cell.
− Př. z Vývoj. biologie: fosforylace při růstu končetin
a) Fosforylace
Posttranslační modifikace proteinů
b) Acetylace
̶ 3 typy
̶ Reverzibilní/ireverzibilní (enzymy: deacetylázy)
̶ Připojení zbytku kyseliny octové (CH3COO-)
̶ Aminokyseliny: Lys
̶ Enzymy: Acetyltransferázy + acetylkoenzym A (subs.) + ATP
̶ Funkce: regulace buněčného cyklu, stabilita chromatinu,
meziproteinové interakce
Posttranslační modifikace proteinů
Př. Acetylace histonů
Acetylkoenzym A
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 28
b) Acetylace
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 29
̶ Př. obecně histony (potom snadná
vazba TF např. z rodiny TCF/LEF,
na uvolněnou DNA)
̶ Př. samotný beta-katenin
Hoffmeier et al., 2017.
Trimethylation and Acetylation of β-Catenin at Lysine 49
Represent Key Elements in ESC Pluripotency.
Cell Rep.
b) Acetylace
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 210
− Př. z Vývoj. biologie: acetylace primárních cilií
Nakakura T et al. 2015
The elongation of primary cilia via the acetylation of α-tubulin
by the treatment with lithium chloride in human fibroblast KD cells.
Med Mol Morphol.
Methylace histonů
c) Methylace
̶ Reverzibilní (enzymy: demethylázy)
̶ Enzymy: Methyltransferázy + S-adenosylmethionin (subs.) + ATP
̶ Připojení CH3 skupiny (hydrofobní)
̶ Aminokyseliny: Arg, Lys
̶ Funkce: epigenetické regulace u jaderných proteinů
Posttranslační modifikace proteinů
S-adenosylmethionin
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 211
c) Methylace
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 212
̶ Př. obecně histony (= zastavení
transkripce např. WNT genů)
̶ Př. samotný beta-katenin
Hoffmeier et al., 2017.
Trimethylation and Acetylation of β-Catenin at Lysine 49
Represent Key Elements in ESC Pluripotency.
Cell Rep.
c) Methylace
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 213
− Př. z Vývoj. biologie: methylace histonů během embryogeneze
Reik, W. 2007
Stability and flexibility
of epigenetic gene
regulation in
mammalian
development.
Nature
d) Ubikvitinace
̶ Reverzibilní (enzymy: deubikvitinázy – DUB)
̶ Připojení ubiquitinu (malý protein, ≈80 aa, 8 kDa)
̶ Komplex enzymů (E1-E3) + ubikvitin (subs.) + ATP
̶ Aminokyseliny: Lys
̶ Funkce: označení proteinů pro degradaci v proteazomu
Posttranslační modifikace proteinů
Proteazom
Ubikvitin
14
d) Ubikvitinace
Posttranslační modifikace proteinů
15 Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 2
www.cisbio.eu
̶ Př. beta-katenin Kaskáda enzymů E1-E3
d) Ubikvitinace
Posttranslační modifikace proteinů
16 Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 2
− Př. z Vývoj. biologie: buněčný cyklus (a chyby v něm)
Rape M. 2018
Ubiquitylation at the
crossroads of development
and disease.
Nat Rev Mol Cell Biol.
e) SUMOylace
̶ Reverzibilní (desumoylační enzymy)
̶ Připojení molekuly SUMO (Small Ubiquitin-related
MOdifier protein, ≈100aa, 12 kDa)
̶ Enzymy: kaskáda E1-E3 (podobně jak u ubikvitinace)
+ SUMO (subs.) + ATP
̶ Aminokyseliny: Lys
̶ Funkce: zvyšuje stabilitu proteinu (ovlivňuje buň.
signalizaci, expresi genů, buněčný cyklus)
Posttranslační modifikace proteinů
SUMO (z angl. Small Ubiquitin-like Modifier)
17 Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 2
e) SUMOylace
Posttranslační modifikace proteinů
18 Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 2
Karami et al., 2017.
Novel SUMO-Protease SENP7S Regulates β-catenin Signaling and Mammary Epithelial Cell Transformation.
Sci Rep.
̶ Př. beta-katenin (nebo Axin)
e) SUMOylace
Posttranslační modifikace proteinů
19 Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 2
− Př. z Vývoj. biologie:
Lomelí H, Vázquez M. 2011
Emerging roles of the SUMO
pathway in development.
Cell Mol Life Sci.
f) Glykosylace
̶ 6 typů (N-, O-, C-, ….)
̶ Reverzibilní (glykosidázy)
̶ Navázání molekuly sacharidu
̶ Enzymy: Glykosyltransferázy +
monosacharidy/polysacharidy (subs.) + ATP
̶ Aminokyseliny: N-gly… (Asp, Arg), O-gly… (Ser, Thr,
Tyr), C-gly… (Try)
̶ Funkce: buněčný transport, komponenty buněčného
povrchu, sekretované proteiny
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 220
f) Glykosylace
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 221
̶ Př. WNT ligand
glykan
glykan
lipid
(acyl)
Více info – viz lipidace
dále
f) Glykosylace
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 222
− Př. z Vývoj. biologie: embryonální vývoj u Tribolium castaneum
Walski T, et al. 2016
Protein N-glycosylation and
N-glycan trimming are
required for postembryonic
development of the pest
beetle Tribolium castaneum.
Sci Rep.
g) Lipidace
̶ Reverzibilní (glykosidázy)
̶ Připojení vyšší mastné kyseliny (amfifilní
charakter)
̶ Aminokyseliny: Cys, nebo Cys-Alif-Alif-X
̶ Enzymy: lipázy/acyl transferázy + acyl (subs.)
+ ATP
̶ Funkce: buněčný transport, součást
buněčných membrán
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 223
g) Lipidace
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 224 Made by Igor Cervenka
̶ Př. WNT ligand
h) Disulfidická vazba
̶ Z angl. cysteine bridges
̶ Reverzibilní (viz vpravo)
̶ Vazba mezi dvěma atomy síry
̶ Enzymy: Dsb + ATP (žádný substrát: oxidace)
̶ Aminokyseliny: 2x Cys
̶ Funkce: vliv na 3D konformaci proteinů,
obecně zvyšují stabilitu molekuly
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 225
h) Disulfidická vazba
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 226
MacDonald et al., 2014
Disulfide Bond Requirements for Active Wnt Ligands
JBC
̶ Př. WNT ligand
h) Disulfidická vazba
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 227
MacDonald et al., 2014
Disulfide Bond Requirements for Active Wnt Ligands
JBC
̶ Př. WNT ligand (+ glykosylace + lipidace)
i) Hydroxylace
̶ Reverzibilní
̶ Připojení OH skupiny (možnost tvorby
H-můstků)
̶ Enzymy: hydroxalázy + 2-oxoglutarát
(subs.) + ATP
̶ Aminokyseliny: Pro
̶ Funkce: vliv na strukturu, umožňuje
vyšší rozpustnost ve vodě
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 228
i) Hydroxylace
̶ Př. tentokrát mimo buň. signalizaci
Kolagen:
Vliv PTM (hydroxylace) na strukturu
proteinu – vznik H-můstků: elasticita
Posttranslační modifikace proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 229
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 230
Osnova
̶ (Meziproteinové) interakce (PPI)
Made by James Harnos
̶ Proteiny
̶ Analýza proteinů
(lokalizace, konformace, aktivita)
̶ Post-translační modifikace (PTM)
Dnes: další PTM, techniky studujících PPI a několik příkladů z Vývoj. biologie
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii31
Proteinové interakce
- Interakce dvou nebo více proteinů
- Biologický význam interakcí
- Chemická podstata interakcí
- Reverzibilita a specifita interakce
- Poznání funkce daného proteinu
(Studium fyziologických procesů)
Made by James Harnos
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii32
Proteinové interakce
- Role v embryogenezi
Elucidation of the Protein Interactome of Drosophila melanogaster
Guruharsha, et al. 2011.
A protein complex network of Drosophila melanogaster.
Cell
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii33
Proteinové interakce: detekce
https://www.creative-proteomics.com/
̶ Fluorescence: podmínka 1
(ko-) lokalizace
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii34
University of Uppsala
̶ Fluorescence:
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii35
https://www.ptglab.com/
̶ Fluorescence: podmínka 2
̶ A) Světelná mikroskopie se širokým zorným polem („wide-field“)
vs. B) konfokální mikroskopie
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii36
̶ Fluorescence: druhy
̶ epi-fluorescence vs. imuno-fluorescence
Princip: GFP a deriváty: přednáška 12 (značení protilátkámi: dnes)
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii37
̶ Imunofluorescence:
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Protilátky:
̶ Adaptivní imunita
̶ Rozpoznání antigenů
̶ Proteinová povaha
̶ Vazba na protein našeho zájmu
̶ Struktura – tvar Y
̶ Řetězce – těžký (H), lehký (L)
̶ Domény – variabilní, konstantní
̶ Třídy:
POLYKLONÁLNÍ MONOKLONÁLNÍ
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii38
̶ Imunofluorescence:
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Protilátky:
https://www.oni.bio/
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii39
̶ Imunofluorescence:
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Protilátky:
Přímá detekce:
̶ Značená primární protilátka
̶ Původní metoda
+ rychlá
- méně univerzální, nižší intenzita signálu
̶ Značená sekundární protilátka
̶ Vazba na primární protilátku
+ univerzální, vyšší citlivost
- pomalejší
Nepřímá detekce:
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii40
̶ Imunofluorescence:
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Protilátky:
̶ Polyklonální: různé B lymfocyty, různé epitopy na antigenu
̶ Monoklonální: jeden klon B lymfocytů, jeden epitop antigenu
̶ Rekombinantní: rekombinantní DNA, bez využívání živočichů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii41
̶ Imunofluorescence: změna lokalizace čeho?
Trio HA DAPIDvl2 FLAGMerge
A) B)
+ +
Proteinové interakce: detekce
(ko-) lokalizace
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii42
Proteinové interakce: detekce
Co-IP + SDS-PAGE/WB
̶ Inkubace lyzátu s protilátkou (Ab)
̶ Imunoprecipitace („vychytání“) částicemi/kuličkami s proteinem A/G
̶ Separace částic od zbytku lyzátu? Centrifugace vs. magnetismus
̶ Analýza vzorku: SDS-PAGE + Western blot
co-IP = studium fyzické interakce proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 243
Separační techniky:
SDS-PAGE
o Dodecyl síranu sodného – polyakrylamidová gelová elektroforéza
o Biochemická metoda pro separaci proteinů
o Rozdělení podle hmotnosti a velikosti řetězce
Pohyb proteinů
o Záporně nabité proteiny putují ke kladné anodě
o Molekulová hmotnost
o Menší molekula = vyšší rychlost = delší vzdálenost
o Větší molekula = nižší rychlost = kratší vzdálenost
Základní informace
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii44
Separační techniky:
SDS-PAGE
Příprava vzorku – denaturace
o Narušení terciární struktury proteinů
o Vysoká teplota
o Přítomnost SDS
o Přítomnost ϐ-merkaptoethanolu
o Dodecyl síranu sodného
o Detergent – amfifilní vlastnosti
o Rozbíjí terciární strukturu proteinů
o Dává proteinům záporný náboj
Molekula SDS
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii45
Separační techniky:
SDS-PAGE
Systém pufrů (diskontinuální)
aa: glycin
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii46
Separační techniky:
SDS-PAGE
Systém pufrů (diskontinuální)
a) Koncentrační gel
• pH 6,8
• Cl-: nejrychlejší pohyb
• Glycin: nejpomalejší
• Koncentrace vzorku do úzkého proužku
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii47
Separační techniky:
SDS-PAGE
a) Koncentrační gel
b) Rozdělovací gel
• pH 8,8
• Glycin získává záporný náboj
• Proteiny migrují na základě molekulové hmotnosti
Systém pufrů (diskontinuální)
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii48
Separační techniky:
SDS-PAGE
Další analýza proteinů
o Hmotnostní spektrometrie
o Barvení stříbrem
o Barvení „brilliant blue“ barvivem
o Western blotting
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii49
Separační techniky:
Western-blotting
o Analýza, detekce a kvantifikace (??) proteinů
o Southern blot (1975) – přenos DNA z gelu na membránu
o ‘Northern’ blot (1977) – ……. RNA ……….
o ‘Western’ blot (1979) – … proteinů ………
o George Stark, Harry Tobwin, Neal Burnette
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii50
Separační techniky:
Western-blotting
o Postup:
SDS-PAGE Transfer na membránu Blokování Značení protilátkami Detekce
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii51
Separační techniky:
Western-blotting
o Postup:
SDS-PAGE Transfer na membránu Blokování Značení protilátkami Detekce
o Elektroforetický transfer
o Membrány – polyvinylové (PVDF),
nitrocelulosové
o Podmínky dle výrobce
o Vizualizace proteinů: př. Ponceau S red
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii52
Separační techniky:
Western-blotting
o Postup:
SDS-PAGE Transfer na membránu Blokování Značení protilátkami Detekce
o Proti nespecifickým vazbám
o Blokovací roztoky
o BSA, sušené mléko
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii53
Separační techniky:
Western-blotting
o Postup:
SDS-PAGE Transfer na membránu Blokování Značení protilátkami Detekce
o Promývání – PBS, TBS
o Primární protilátka
o Sekundární protilátka
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii54
Separační techniky:
Western-blotting
o Postup:
SDS-PAGE Transfer na membránu Blokování Značení protilátkami Detekce
o Radioizotopy
o Enzymatické reakce – alkalické
fosfatázy, křenové peroxidázy
o Chemiluminiscence
o CCD kamera
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii55
Křenová peroxidáza
o ,,Horseradish peroxidase“
o Metaloenzym
o Substrát: H2O2
o 1,2-diaminobenzen
o Žlutooranžový produkt
o Detekce: pomocí CCD kamera
HRP
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii56
Separační techniky:
Western-blotting
o Výsledek – jak vlastně vypadá výstup?
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii57
Proteinové interakce: detekce – další metody
Blízkostí indukované značení
̶ In vivo metoda
̶ Fúze proteinu s enzymem BL
̶ Značení okolních proteinů
̶ Př. Značka: biotin
̶ Detekce: (WB) + MS
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii58
Proteinové interakce: detekce – další metody
Blízkostí indukované značení
Rosenthal SM, et al. 2021
A Toolbox for Efficient ProximityDependent
Biotinylation in
Zebrafish Embryos.
Mol Cell Proteomics.
− Př.
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii59
Proteinové interakce: detekce – další metody
Blízkostí indukovaná ligace (PLA – Proximity ligation assay)
̶ In vivo metoda
̶ Kovalentní provázání komplexu – bifunkční činidla
̶ Komplex se při izolaci nerozpadá
̶ Nebezpečí vazby náhodných proteinů
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii60
Proteinové interakce: detekce – další metody
Blízkostí indukovaná ligace (PLA – Proximity ligation assay)
̶ Př.
Bedzhov I, Stemmler MP. 2015
Applying the proximity ligation assay (PLA)
to mouse preimplantation embryos for
identifying protein-protein interactions in
situ.
Methods Mol Biol.
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii61
Proteinové interakce: detekce – další metody
FRET: intermolekulární
Wong KL, et al..2018
ERK Activity Dynamics during
Zebrafish Embryonic
Development. Int J Mol Sci.
− Př.
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii62
Proteinové interakce: detekce – další metody
Afinitní purifikace (AP)
̶ Afinita proteinu zájmu k ligandu
̶ Levná a jednoduchá metoda
̶ Malá specifita a senzitivita
̶ Připojení proteinu na pevnou matrici
̶ Aplikace buněčných proteinů na matrici
̶ Zachycení proteinů interagujících s
proteinem na matrici
̶ Analýza zachycených proteinů
(hmotnostní spektrometrie)
In vitro AP
̶ Značení proteinu – protilátky, genetická
modifikace (FLAG, HA, GFP)
̶ Matrice s afinními molekulami
̶ Aplikace buněčného lyzátu
̶ Eluce a analýza
In vivo AP
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii63
Proteinové interakce: detekce – další metody
Kvasinkový dvouhybridový systém
̶ Umělé genové konstrukty – fúzní proteiny:
̶ DNA-vazebná doména + ,,bait“
̶ Aktivační doména + ,,prey“
̶ Interakce → transkripce určitého genu (lacZ)
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii64
Proteinové interakce: detekce – další metody
Kvasinkový dvouhybridový systém
̶ Proteinová interakce
̶ Navázání vazebné domény poblíž reportérového
genu
̶ Aktivační doména způsobí aktivaci jeho transkripce
̶ Exprese reportérového genu (změna barvy
kvasinkové kolonie)
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii65
Proteinové interakce: detekce – další metody
Proteinové čipy
̶ Matrice s mnoha navázanými proteiny
̶ Detekce – fluorescence/HRP
+ Analýza velkého množství interakcí zároveň
- Ovlivnění struktury a vlastností připojením na
matrici, Náročná tvorba čipů (finance+čas)
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii66
Manipulace funkce proteinů
Photo courtesy of Neurobyn.
Optogenetika
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii67
Manipulace funkce proteinů
Optogenetika: nejenom neurony
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii68
Manipulace funkce proteinů
Optogenetika: nejenom neurony
− Př.
Johnson HE et al., 2020.
Optogenetic Rescue of a Patterning
Mutant.
Curr Biol.
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii 269
Shrnutí
̶ (Meziproteinové) interakce (PPI)
Made by James Harnos
̶ Proteiny
̶ Analýza proteinů
(lokalizace, konformace, aktivita)
̶ Post-translační modifikace (PTM)
Dnes: další PTM, techniky studujících PPI a několik příkladů z Vývoj. biologie
Bi1130 - Metody analýzy proteinů využívané ve Vývojové biologii70
Děkuji Vám za pozornost