Imunologie cvičení 9 Metody sledování imunity bezobratlých MVDr. Mgr. Monika Dušková, Ph.D. Nemají adaptivní imunitu - není tvorba specifických protilátek, klonální selekce lymfocytů ani imunologická paměť Mají pouze vrozenou imunitu - reakce jsou nespecifické, rychlé, navzájem se ovlivňují a spolupracují Analogie krvinek – hemocyty, nejlépe prozkoumány u hmyzu, typy: •koagulocyt, sférulocyt - srážení hemolymfy •oenocyt - hojivé procesy •granulocyt, plazmatocyt – eliminace cizorodých částic Počet a aktivitu hemocytů ovlivňují hormony, poranění a infekce. - Imunita bezobratlých PROTOKOL Teorie Pozorovn bunk hemocyt hemolymfa u PPRAVA Hemocyty zavíječe voskového – v mikroskopu můžeme pozorovat různé typy volných buněk, zejména granulocyty (výrazná zrnka uvnitř buňky) a plasmatocyty (mění tvar – vytvářejí panožky a mohou přilnout k povrchu). Foto P. Hyršl Foto: P. Hyršl Fagocytóza - částice zachycovány hemocyty, pohlceny a natráveny Nodulace: agregací hemocytů vznikají útvary zvané nodule. •shlukování různých typů hemocytů kolem cizorodého materiálu •v pokročilé fázi procesu se zapojují granulocyty, které následně lyzují. •dále do reakce vstupují plazmatocyty, které se shlukují kolem zlyzovaných granulocytů. •z 20-30 vrstev plazmatocytů se pak vytváří samotná nodule. •zároveň se vytváří melanin obalující cizí částice Enkapsulace: při proniknutí materiálu větších rozměrů (parazitičtí prvoci, mnohobuněční parazité, nebiogenní látky - sklo, latex apod.) Princip je podobný jako u nodulace s tím, že plazmatocyty se nemusí procesu účastnit a celý útvar (kapsule) je ve výsledku obalen melaninem. Obranné mechanismy bezobratlých Melanin – polymerní pigment odvozený od aminokyseliny tyrozinu nebo tryptofanu procesem oxidace a polymerace. V imunitních reakcích u bezobratlých důležitá úloha – obalení a izolace škodlivin a zacelování poranění. Tvorba melaninu je výsledkem tzv. fenoloxidázové kaskády, která je jednou ze složek humorální imunity. Přeměna zbytků aminokyseliny tyrozinu na polymer melanin, katalyzováno enzymem - fenoloxidázou. Základní pojmy: Fenoloxidáza (PO) je přítomna v hemolymfě a hemocytech ve formě neaktivního proenzymu – profenoloxidázy K aktivaci dochází kontaktem se složkami patogenů - lipopolysacharid nebo zymosan. Uměle lze profenoloxidázu hmyzu aktivovat metanolem Podstatou aktivace je změna konformace profenoloxidázy a tím se uvolí aktivní místo enzymu pro substrát. Mezi substráty fenoloxidázy patří tyrozin a další fenolické látky, které jsou přeměňovány až na pigment melanin Inhibice PO kaskády: fenylthiomočovina (PTU) - může se trvale vázat do místa pro substrát, avšak reakce dál nepokračuje Využití v experimentech – aby hemolymfa nezhnědla… Tvorba melaninu