§
METODY FAGOCYTÓZY

- vyšetření zahrnuje:
krevní diferenciál - % zastoupení LEU
izolace LEU
stanovení funkce LEU

testy na sílu ADHEZE a INGESCE
•A) test s metakrylátovými částicemi
•LEU (popř. krev) + � MSHP /inertní metakrylátové částice/
•
•
•na
•
testadaing
na povrchové receptory fagocytu se naváží MSHP
necháme kultivovat, barvíme
-počítá se: fagocytární index (FI) a procenta fagocytózy (%F)
FI = počet fagocytovaných částic na povrchu, uvnitř/ lomeno počtem fagocytujících BB
 %F = počet fagocytujících BB / celkový počet BB x 100

B) test se škrobovými zrny
-počítá se: fagocytární index (FI) a procenta fagocytózy (%F)
FI = počet fagocytovaných částic na povrchu, uvnitř/ lomeno počtem fagocytujících BB
 %F = počet fagocytujících BB / celkový počet BB x 100
•Odstranění velkých částic centrifugací

•Testy na mikrobicidní aktivitu LEU
•
• · test na počet přeživších bakterií
•kultivace
•
BAKTERIE ubytekbakterii
-hodnocení:
* bakterie se vysejí na plotny
* spektrofotometricky, úbytek zákalu

Testy na metabolickou aktivitu LEU, NBT test
hodnocení: - pod vlivem CHTS při kultivaci dojde k fagocytóze, jejíž součástí je oxidativní
vzplanutí
-Redukce vlivem oxidačních pochodů v buňce. NBT nitroblue tetrazolium chlorid bezbarvý se změní na
modrý formazán – stanovení SPEKTROFOTOMETREM
-Touto metodou se prokazuje hlavně schopnost fagocytů tvořit kyslíkové radikály aktivací NADPH
oxidázy
redukce

•CHEMILUMINISCENČNÍ test
•pro kvantitativní hodnocení oxidativního vzplanutí
Vznikají elektronově excitované stavy, které emitují fotony. Emitované fotony zachycovány tzv.
luminoforem (luminol, izoluminol nebo lucigenin), spontánní  a aktivovaná CL (pomocí zymozanu),
luminometr
               NADPH
                oxidáza
O2 + el              O2- .     radikál, anion
Dalšími reakcemi vznik kyslíkových radikálů
luminometr
plus luminol
CHEMOTAKTICKÝ STIMUL
vnitřní – produkty vlastních BB – komplement, imunokomplex, IL, prostaglandiny
vnější – produkty ze stěn mikrobů – lipopolysacharid, GLP, manan




Metody fagocytózy
•VYUŽITÍ v praxi :
•zjištění : * nedostatečnosti či poruch jednotlivých fází fagocytózy
•* aktivity fagocytů u pacientů s opakovanými infekcemi, opakovanou léčbou antibiotiky, nádorovým
onemocněním, artritidou či revmatoidními onemocněními, při zátěžových situacích
•