Jméno:                                                     Datum:

Téma 05:              Mikropropagace bylin - iniciace kultury

Materiál: listy africké fialky (Saintpaulia ionantha Wendl.), tořivky (Streptocarpus hybridus),
rhizomy Nephrolepis exaltata (L.) Schott, květní stonky Phalaenopsis Blume, apod.

Pomůcky:             vypsat

Média:      M-S základní soli, B5 vitamíny, sacharóza 20 g.l^-1, BA 1 mg/l, NAA 1 mg/l, agar 5,5
g.l^-1, pH 5,7

Postup práce:

1.    Čerstvě odebrané rostlinné orgány opláchneme destilovanou vodou – omytí hrubších nečistot
z povrchu

2.    Desinfekce v laminárním boxu:          v 70% etanolu             30 sekund - 1 minuta

3.    Desinfekce v 15% roztoku SAVO v SDV (v/v), s kapkou TWEEN

15 minut (třepačka)

4.    3x po dobu 3 minut oplach SDV

5.    Přenos desinfikovaných materiálů do sterilní Petriho misky

6.    Z listů sterilně vyřízneme segmenty čepele o průměru asi 1 cm, u segmentů rhizomů odřízneme
asi 0,5 cm od řezné plochy, ze stonků orchideje nařežeme nodální segmenty s axilárním pupenem.

7.    Inokulace segmentů na povrch agarového média F1 (M-S, 2% sacharóza, 1 mg/l NAA, 1 mg/l BAP,
0,65% agar) svrchní epidermis na povrch media.

8.    Zaznamenáme si počet segmentů v kultuře (v kultivační nádobě a počet nádob).

Hodnocení

V následujících týdnech kontrolujeme čistotu kultur a vyhodnotíme četnost segmentů, na kterých
došlo k přímé organogenezi nebo iniciaci tvorby kalusu a organogenezi nepřímé. Vyhodnotíme rovněž
množitelský koeficient.


Literatura

Warburton, J., Grout, B.W.W. and Short, K.C. (1984): In vitro selection for cold tolerant lines of
Saintpaulia ionantha (Wendl.).- In: "Plant Tissue and Cell Culture - Applications to Crop
Improvement" edited by F. Novák, L. Havel and J. Doležel, pp. 355-357, ČSAV, Praha.

Grout, B.W.W. (1990): African violet. - In: Handbook of Plant Cell Culture. Vol.5. (Eds.): P.V.
Ammirato, D.A. Evans, W.R. Sharp and Y.P.S. Bajaj. McGraw-Hill, Inc, pp. 181-205.

Khan, S., S. Naz, K. Ali (2007): Callus induction, plant regeneration and acclimatization of
African violet (Saintpaulia ionantha) using leaves as explants. - Pak. J. Bot., 39(4): 1263-1268.