Imunologie cvičení Aglutinační metody • MVDr. Mgr. Monika Dušková, Ph.D. Aglutinace •Stará sérologická metoda •Reaguje Ab s korpuskulárním Ag za vzniku aglutinátu – shluk vločkovité konzistence •Provážou se molekuly Ag přes molekuly protilátek • •Pozor rozdíl: aglutinace x precipitace • shluk x sraženina • •Jako korpuskulární antigen může vystupovat: bakteriální buňka, latexová částice s navázaným Ag • erytrocyt – hemaglutinace • •Přímá a nepřímá aglutinace: reagují tzv. inkompletní protilátky, které se váží na povrch např. erytrocytu, ale neaglutinují. Aglutinace se dá prokázat až po přidání antiglobulinového séra (protilátky proti protilátkám) tzv. Coombsovo sérum • • • J06 Úvod do serologie, precipitace a aglutinace - PDF Stažení zdarma Dynamika tvorby aglutinátu: v přebytku některé ze složek nevytvoří dostatečně Hemaglutinace Korpuskulární antigen je erytrocyt se svými povrchovými znaky Výsledný aglutinát je dobře vizuálně hodnotitelný pouhým okem Nevýhody: nízká citlivost a omezená životnost erytrocytů Povrch erytrocytů lze opracovat a tím zvýšit citlivost reakce (bromelin, neuraminidáza) Bromelin je proteolytický enzym, získává se z čerstvého ananasu, doplněk stravy… údajně protizánětlivé účinky, proti otokům, zlepšuje trávení, brání srážení krve – rozkládá fibrin Bromelin | CelostniMedicina.cz Anti-D Blend (LDM3/ESD1 clones) for RhD typing manual tube method and IAGT 10 x 10 ml kit size ALBAclone® Monoclonal Rh D typing sera Quotient - Diagnostic Products Využití aglutinační reakce k určení antigenů systému AB0 Aglutinogen - antigen na povrchu erytrocytů Aglutinin – protilátka v séru Lucie Skřičková, Masarykova univerzita, 2018 Struktura a biosyntéza antigenů systému AB0 Příklad využití hemaglutinační metody v našem výzkumu Disertační práce Mgr. Petra Ovesná, Ph.D. Stanovení a počítačové hodnocení skupinových vlastností ABO systému v kostních tkáních Vyšetření antigenů systému ABO z fosilních kosterních nálezů Stanovení antigenů systému ABO je možné i po dlouhé době po smrti jedince díky jejich sacharidové struktuře, která je činí velmi stabilní. metoda absorpčně inhibiční (AI) ‐ k vyšetřovanému materiálu se přidá diagnostické sérum, které obsahuje protilátky, a které se v případě shodné specifičnosti navážou na antigeny ve vzorku (fáze absorpce). V dalším kroku je vyšetřen supernatant (tj. sérum po přidání k vzorku) na přítomnost a množství protilátek pomocí diagnostických erytrocytů. Pokud je aglutinace u vzorku slabší než v původním séru (inhibice aglutinace), znamená to, že část protilátek se navázala na antigeny kostí a ty jsou tedy ve vzorku přítomny. Aglutinace stejně silná jako v původním séru značí negativní reakci (tj. nepřítomnost antigenu v kosti). Schéma absorpčně inhibiční metody, vzorek obsahuje antigen A Petra Ovesná, Masarykova univerzita, 2012 Námi studovaný soubor zahrnoval 84 kosterních pozůstatků o stáří cca 4500 let z naleziště Hoštice I za Hanou, které byly uloženy v půdě. Tyto kosti byly vyšetřeny absorpčně inhibiční metodou ve dvou modifikacích – při použití polyklonálních a monoklonálních diagnostik. Za určené byly považovány pouze ty kostní vzorky, u kterých došlo ke shodě výsledků oběma metodami; příslušnost ke skupině O musela být potvrzena diagnostikem anti‐H. Takto bylo stanoveno 64 (tj. 76,2 %) kostních vzorků. Krevní skupinu A vykazovalo pět z nich, zbylých 59 vzorků vykazovalo příslušnost ke skupině O. Zpracovávaný soubor vzorků a výsledek