Imunologie cvičení
Metody sledování imunity bezobratlých
  MVDr. Mgr. Monika Dušková, Ph.D.

Nemají adaptivní imunitu
- není tvorba specifických protilátek, klonální selekce lymfocytů ani imunologická paměť

Mají pouze vrozenou imunitu
- reakce jsou nespecifické, rychlé, navzájem se ovlivňují a spolupracují
Analogie krvinek – hemocyty, nejlépe prozkoumány u hmyzu, typy:
•koagulocyt, sférulocyt - srážení hemolymfy
•oenocyt -  hojivé procesy
•granulocyt, plazmatocyt – eliminace cizorodých částic
Počet a aktivitu hemocytů ovlivňují hormony, poranění a infekce.
-
Imunita bezobratlých

PROTOKOL Teorie Pozorovn bunk hemocyt hemolymfa u PPRAVA Hemocyty zavíječe voskového – v mikroskopu
můžeme pozorovat různé typy volných buněk, zejména granulocyty (výrazná zrnka uvnitř buňky)
a plasmatocyty (mění tvar – vytvářejí panožky a mohou přilnout k povrchu). Foto P. Hyršl
Foto: P. Hyršl

Fagocytóza - částice zachycovány hemocyty, pohlceny a natráveny
Nodulace: agregací hemocytů vznikají útvary zvané nodule.
•shlukování různých typů hemocytů kolem cizorodého materiálu
•v pokročilé fázi procesu se zapojují granulocyty, které následně lyzují.
•dále do reakce vstupují plazmatocyty, které se shlukují kolem zlyzovaných granulocytů.
•z 20-30 vrstev plazmatocytů se pak vytváří samotná nodule.
•zároveň se vytváří melanin obalující cizí částice
Enkapsulace: při proniknutí materiálu větších rozměrů
(parazitičtí prvoci, mnohobuněční parazité, nebiogenní látky - sklo, latex apod.)
Princip je podobný jako u nodulace s tím, že plazmatocyty se nemusí procesu účastnit a celý útvar
(kapsule) je ve výsledku obalen melaninem.
Obranné mechanismy bezobratlých

Melanin – polymerní pigment odvozený od aminokyseliny tyrozinu nebo tryptofanu procesem oxidace a
polymerace.
V imunitních reakcích u bezobratlých důležitá úloha – obalení a izolace škodlivin a zacelování
poranění.
Tvorba melaninu je výsledkem tzv. fenoloxidázové kaskády, která je jednou ze složek humorální
imunity.
Přeměna zbytků aminokyseliny tyrozinu na polymer melanin, katalyzováno enzymem - fenoloxidázou.
Základní pojmy:
Fenoloxidáza (PO) je přítomna v hemolymfě a hemocytech ve formě neaktivního proenzymu –
profenoloxidázy
K aktivaci dochází kontaktem se složkami patogenů - lipopolysacharid nebo zymosan.
Uměle lze profenoloxidázu hmyzu aktivovat metanolem
Podstatou aktivace je změna konformace profenoloxidázy a tím se uvolí aktivní místo enzymu pro
substrát. Mezi substráty fenoloxidázy patří tyrozin a další fenolické látky, které jsou přeměňovány
až na pigment melanin
Inhibice PO kaskády:
fenylthiomočovina (PTU) - může se trvale vázat do místa pro substrát, avšak reakce dál nepokračuje
Využití v experimentech – aby hemolymfa nezhnědla…
Tvorba melaninu