Elektroforéza



Rozdělení proteinů na základě pohyblivosti v el. poli
K realizaci je nutné mít:
•Stejnosměrný el. proud
•Speciální elektroforetické vany
•Vhodný pufr a nosič (dříve papír, acetátcelulóza, agar) nyní agaróza polyakrylamidový gel

kombinace metod elektroforetických a imunodifúzních
•Bílkoviny se dělí v závislosti na molekulové váze a elektrickém náboji jednotlivých molekul v
přítomnosti vhodného pufru a na vhodném nosiči.
•Dělení  séra
- jednotlivé obloučky znamenají jednotlivé bílkoviny
® detekce až 35 sérových proteinů

Při běžné elfo se sérum dělí na zónu albuminu, α – 1, α – 2, β, γ globulinů. Stanovení zastoupení
jednotlivých frakcí může mít význam při hodnocení stádia zánětlivého procesu. Při akutních zánětech
stoupá zastoupení albumínů a α – 1, později i α – 2 globulinů, při chronických zánětech dochází ke
zvýšení zastoupení γ globulinů a poklesu albuminu
Elfo sérových proteinů

Imunoelektroforéza podle WILLIAMSE a GRABARA:
•1953 Williams a Grabar
•2 stupně: 1.  nalití destičky ( agarózní gel s pufrem )
   vytvoření 2 žlábků a nanesení Ag mezi ně
•po rozdělení elektroforézou se do žlábků 2. napipetují protilátky
•  inkubace 48 hodin v lednici   ® dochází k DIFUZI
•® v místě ekvivalence se vytváří PRECIPITAČNÍ obloučky

Raketová elfo
•- Laurell 1966
•- kombinace jednoduché radiální imunodifúze s elektroforézou
•- monospecifická Ab + jeden Ag /či směs Ag/
Ab v gelu
užívá se pro zjišťování koncentrace Ag – koncentrace je přímo úměrná výšce „raketky“

                    Imunofixace I.
Rozdělení různých proteinů na základě jejich pohyblivosti v el. poli modifikační metodou
1.stupeň: Elfo vyšetřovaného séra
2.Stupeň: na agarózu se položí plastikované maska s výřezy, naplní se s antiséry (anti IgG, IgA,
IgM, anti kappa, anti lambda), pak porovnání s precip. reakce s normálním sérem, TSP – testovaná
séra pacientů
Hodnocení
a)Okometricky
b)denzitometricky