Bi6120 Rostlinné explantáty
2.
Základní podmínky
kultivace in vitro
Požadavky na vybavení laboratoře

Základní podmínky kultivace in vitro
Øaseptická kultura   nutnost sterilizace a desinfekce
Øvhodná výživa explantátu            živná média
Øvhodné fyzikální podmínky
u – osvětlení (intenzita, fotoperioda…)
u –  teplota
u – koncentrace plynů
u – vlhkost vzduchu

Sterilizace a desinfekce
uA. Fyzikální
u • mechanická a elektrostatická
u vzduch očkovacích boxů (laminární, 2. třída)
u filtrace termolabilních látek - filtry:
u skleněné (frity G5, S4)
u membránové (Seitz, Millipore, Sartorius) 0,22mm
u • UV záření (kultivační místnosti, boxy)
u • teplota
u suché nebo vlhké teplo

Mercury UV bulbs primarily emit light at 254 nanomers, while pulsed xenon UV bulbs emit UV light at
several different germicidal wavelengths.

Laminární box, flowbox, očkovací box
uPro zajištění sterility prostředí
uVzduch je veden přes HEPA filtr a plynulým laminárním prouděním směrem k uživateli uObvykle z
nerezavějící oceli bez mezer nebo spojů, kde by se mohly usazovat spory
uHorizontální a vertikální
Katalog firmy Gelaire

horizontální:
FATRAN (JZD Pokrok Žilina)
GELAIRE (AV ČR Poříčí)
• vertikální:
UNIFLOW (z Kolína/n. R.)
GELAIRE, AURA (v A2)
Obsah obrázku text, interiér Popis byl vytvořen automaticky Obsah obrázku text, interiér, modrá
Popis byl vytvořen automaticky Obsah obrázku text, interiér Popis byl vytvořen automaticky

HEPA - filtr
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/b/b1/HEPA_Filter_diagram_en.svg/607px-HEPA_Fil
ter_diagram_en.svg.png
https://en.wikipedia.org/wiki/HEPA
„High Efficiency Particulate Air“
Mechanismy zadržení částic
1. efekt síta = velké částice
2. menší částice = inertní k proudění
3. nejmenší částice = Brownův pohyb

u
bakterie a kvasinky na lidském jazyku


Očkovací box 1. bezpečnostní třída
(digestoř)
box nezajišťuje podmínky pro sterilní práci

Očkovací box 2. bezpečnostní třída
GELAIRE, AURA – je možné pracovat i s GMO


Očkovací box 3. bezpečnostní třída
užití pro práci s vysoce infekčními, toxickými nebo
radioaktivními materiály apod.

Sterilizace teplem
suché teplo
120 - 170°C
-horkovzdušné sušárny
-kahan
-sterilizační přístroj
sklo,nástroje
vlhké teplo
voda, živná média, roztoky, filtrační papír
normální tlak
- zavařovací hrnec
- Kochův sterilační přístroj
vodou chlazený plášť
zvýšený tlak
- tlakový hrnec
- autokláv
100kPa, 121°C
Autokláv 12L VORY 12-B KL. B + Tiskárna CERTOCLAV-EL 12L / 18L stolní autokláv | Laboratorní
přístroje | | BDL.cz Mikrovlnný autokláv Microjet/ Microjet Microwave autoclave | BioVendor LM

u



u



u



u

Persteril – kyselina peroctová jako aktivní složka, od r. 2019 nelze volně prodávat, tj. pouze přes
IČO, jako prekurzor výbušnin
H202 – používá se 3% (pokud ve vyšší koncentraci, tak je třeba naředit)
SAVO – chlornan sodný v méně než 5% obsahu je v originálním a pak se ještě ředí, 10 – 20 min
HgCl2 – 0.1-0.2%, 3 min, Famosept - Phenylmercury Borate (obsahuje rtuť)
Ag se používá třeba tam, kde se nedají použít halogeny (kvůli nežádoucím meziproduktům nebo korozi
materiálu…)
Triton-X100 – častý, molekula složená z hydrofobní a hydrofilní části, snadno proniká membránou







Obsah obrázku interiér, police, soupravy, pouzdro Popis byl vytvořen automaticky Obsah obrázku
text, interiér, toaleta, křeslo Popis byl vytvořen automaticky Plant Cell Tissue Culture Chambers –
Plant Cell Culturing | Geneva Scientific




Virus Free Potato Tuber Seed Production Through Meristem Culture In Tropical Asia - SciAlert
Responsive Version
Papírový můstek







Složení živných médií
u


Aminokyseliny- jako zdroj N lépe využitelný pro růst rostlin, využívány pro podporu růstu
Myo-inositol is important for phosphate storage, cell wall biosynthesis, the production of stress
related molecules, cell-to-cell communication, storage and transport of plant hormones.
Polyaminy – obecně stimulují růst (vyskytují se ve všech organizmech – zvýšením jeho množství
(externím dodáním) dojde ke stimulaci
Kokosové mléko – článek Coconut water, rozdíl mezi kokosovou vodou a mlékem…




cukry mají funkci zdroje uhlíku, ale i osmotickou



















































http://www.sigmaaldrich.com/life-science/molecular-biology/plant-biotechnology/tissue-culture-proto
cols.html
u