Jméno:
Datum:

Téma 03:              Nácvik práce ve sterilních podmínkách –

                            Pasážování axenických kultur („subculture“)


Materiál: in vitro kultury Drosera ultramafica, Dionaea muscipula, Saintpaulia ionantha.,
Streptocarpus wendlandii, aj.


Média: M-S základní soli (plná koncentrace, ½ , 1/3 + aktivní uhlí), B5 vitamíny, sacharóza 20
g.l^-1, agar 6 g.l^-1, pH 5,5

Pomůcky: (vypsat)

Postup práce:

1.    Kultivační nádoby s kulturami přeneseme z kultivační místnosti do boxu.

2.    Připravíme si kultivační nádoby s čerstvým médiem a ostatní pomůcky.

3.    Opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby.

4.    Sterilní pinzetou vyjmeme explantáty na sterilní Petriho misku. Rosnatky ponecháváme
v otevřených nádobách co nejkratší dobu. Jsou náchylné na přeschnutí.

5.     Oddělíme samostatné rostlinky nebo odřízneme nekrotizované bazální části explantátů,
izolované apikální části vsadíme do čerstvého média.

6.    Znovu opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby a uzavřeme ji uzávěrem.

7.    Zapíšeme datum a číslo kultury a svou značku.

8.    Kultivujeme v kultivační místnosti na světle (studené bílé zářivky, fotoperioda 16/8, PAR
30-50 μmol.m^-2.sec^-1) při 22ºC po dobu 4 týdnů.

Hodnocení

V následujících týdnech kontrolujeme čistotu kultur a vývoj explantátů.

Poznámka:

V případě, že chceme převádět kultury do nesterilních podmínek, je vhodné je nechat několik týdnů
zakořenit na médiu s nižší koncentrací minerálních látek (např. 1/3 MS+U nebo ½ MS).