Jméno:                                                                Datum:

Téma: 04b       Mikropropagace kultivarů miniaturní růže - iniciace


Kultivary miniaturních růží se velmi dobře rozmnožují metodou in vitro. Iniciace kultury a její
další růst a vývoj je silně ovlivňován genotypem zdrojové rostliny. Růže v kultuře in vitro trpí
často již po několika dnech na klasickém MS médiu chlorózou z nedostatku železa. Nahrazením EDTA za
EDDHA (ethylen-diamin-dihydroxy-fenylacetát) vzniká stabilnější chelát železa, které je tak delší
dobu pro explantáty lépe dostupné a chlorózy kultur nebyly patrné více než 3 měsíce (Van der Salm
et al. 1994).


Materiál: Prýty in vitro kultury miniaturní růže (Rosa sp.). Pokud kultura in vitro není
k dispozici, je možné použít prýty z kultury v květináči, které běžným postupem povrchově
desinfikujeme.


Médium:              1R = Van der Salmova modifikace MS média, vitamíny B5, 3% sacharosa, 0,7%
agar, 0,5 mg.l^-1 BA, 0,1 mg.l^-1 IAA, pH 5,5


Postup:

1.    Přenes kultivační nádoby s kulturou miniaturní růže do sterilního laminárního boxu.

2.    Připrav kultivační nádoby s čerstvým médiem a sterilní nástroje (pinzety, skalpely).

3.    Ožehni okraj uzávěru kultivační nádoby s kulturou a po otevření ožehni znovu hrdlo nádoby
plamenem.

4.    Vyjmi kulturu z kultivační láhve a polož na sterilní Petriho misku ve flowboxu.

5.    Rozřež prýty na 2nodální segmenty a odstraň listové čepele sterilním skalpelem. Ponech pouze
3 mm řapík od každé čepele.

6.    Odtrhni sterilní pinzetou zbytky řapíků a odhal axilární pupeny.

7.    Zapíchni bázi segmentu do pevného 1R media a láhev uzavři uzávěrem.

8.    Popiš kulturu.

9.    Zapiš počet segmentů v kultivační nádobě a počet inokulovaných kultivačních nádob.

10.  Kultivuj na světle v kultivační místnosti (30 – 50 μmol.m^-2.sec^-1, fotoperioda 16/8hod) při
25ºC po dobu čtyř týdnů.


Hodnocení:

V následujících týdnech kontroluj kontaminaci a růst a vývoj kultur. Odstraňuj kontaminované
kultury.

Po čtyřech týdnech zaznamenej koeficient množení (průměrný počet prýtů na 1 explantát).


Literatura:

·           Hasegawa, P.M. (1979): In vitro propagation of rose. - HortScience, 14: 610-612.

·           Bressan, P.H., Kim, Y.-J., Hyndman, SE., Hasegawa, P.M. and Bressan, R.A. (1982):
Factors affecting in vitro propagation of rose. - J. Am. Sot. Hortic. Sci., 107: 979-990.

·           Van der Salm T P. M., C. J. G. Toorn, Ch. H. Hänisch ten Cate, L. A. M. Dubois, D. P.
Vries and H. J. M. Dons (1994): Importance of the iron chelate formula for micropropagation of Rosa
hybrida L. ‘Moneyway’. - Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 37: 73-77.