Jméno:
Datum:

Téma 05b:  Iniciace kalusové kultury z klíčních rostlin Daucus carota ssp. carota L.


Základním předpokladem pro úspěšnou kulturu in vitro je její sterilita. Díky použití sterilně
vypěstovaných klíčních rostlin může být iniciace kalusu snadnější než použití nesterilního kořene
mrkve s požadavkem desinfekce před jeho zavedením do kultur.

.

Materiál: klíční rostliny mrkve (karotky)          Daucus carota ssp. carota L.

Pomůcky:


Médium: 1D = MS základní soli, B5 vitamíny, sacharóza 20 g.l^-1, 2,4-D (0,1 mg/l),
               ztuženo 0,7% agarem, pH 5,7

Postup práce:

1.Asepticky vypěstované klíční rostlinky mrkve přemístěte na sterilní Petriho misku.

2. Sterilním skalpelem rozdělte rostlinky na kořen, stonek a list.

3. Ožíhejte okraj víčka a po jeho sejmutí i okraj kultivační nádoby. Do každé kultivační nádoby
vložte 4 – 5 explantátů bazální řeznou plochou do agarového média 1D (MS, 2% sacharóza, 0,1 mg/l
2,4-D, 0,7% agar), každý typ rostlinného orgánu do samostatné nádoby.

4. Mezi jednotlivými operacemi odkládejte skalpel a pinzetu do 96% ethanolu a opakovaně nástroje
ožehávejte.

5.       Po inokulaci ožíhejte opět okraj kultivační nádoby a uzavřete víčkem.

6.      Zaznamenejte si počet segmentů v kultuře (v kultivační nádobě a počet nádob).

7.       Kultivační nádoby umístěte do termostatu a kultivujte ve tmě při teplotě 25°C.


Hodnocení:

V následujících týdnech kontrolujeme čistotu kultur a vyhodnotíme četnost segmentů, na kterých
došlo k iniciaci tvorby kalusu. Vyhodnotíme také úspěšnost iniciace kalusu na různých rostlinných
orgánech.