OPTIMALIZACE SEPARAČNÍCH PROCESŮ - P8 Zjistěte optimální počáteční a konečnou koncentraci acetonitrilu při gradientu dvousložkové mobilní fáze, tak, aby bylo dosaženo separace všech látek ve směsi, s rozlišením Rs alespoň 1,5 (Rs > 1,5) v průběhu gradientu. Předpokládejte celkovou dobu gradientu 2 min. Parametry a a m potřebné pro optimalizaci získáte lineární regresní analýzou isokratických dat s využitím modelu log k — (p. K řešení připojte grafy isokratických závislostí, hodnoty korelačních koeficientů a získáte parametrů a a m, které následně použijete pro výpočet elučních objemů látek při gradientově eluci. K optimalizaci použijte metodu okénkových diagramů (závislosti rozlišení sousedních dvojic látek na počáteční koncentraci při gradientu, A), s využitím editoru Excel. Připojte grafy okénkových diagramů s vyznačením optimálních parametrů gradientu. Za předpokladu gausovského tvaru elučních křivek všech látek vypočtěte tvar chromatogramu pro optimální podmínky separace. Obrázek optimalizovaného chromatogramu připojte k řešení. Vstupní data • použitá kolona: Kinetex XB-C18, 50x3.0 mm, 2.6 um • mobilní fáze: 10 mM octan amonný + acetonitril • průtok mobilní fáze: 2 ml/min • požadovaný čas gradientu: tc, = min • počáteční koncentrace acetonitrilu: A = % acetonitrilu • konečná koncentrace acetonitrilu: q>c = % acetonitrilu • mrtvý objem kolony: VM = 0.218 ml • účinnost kolony: N = 9500 pater • zpoždění gradientu: VD = 0.94 ml • tabulka naměřených elučních objemů látek za isokratických podmínek: mobilní fáze (% acetonitrilu) 15% 20% 25% 30% látka VR(m\) VR(m\) y r (ml) FÄ(ml) (-)-epikatechin 0.49 0.34 0.29 0.26 rutin 0.96 0.44 0.30 0.26 naringin 2.02 0.72 0.40 0.30 morin 3.40 1.39 0.74 0.47 kvercetin 5.63 2.14 1.03 0.57 hesperetin 12.58 4.59 2.08 1.14 biochanin A 61.43 21.61 8.70 4.06 Rovnice lineárního isokratického modelu: log A: = -m -cp + a Rovnice pro výpočet elučních objemů při gradientu: VR =--log[2.3 XmB • VM ■ 10a"m A - VD +1]+ VM + VD kde a a m jsou parametry jednotlivých látek vypočítané z lineárních závislostí za isokratický podmínek, VM je mrtvý objem kolony, VD zpoždění gradientu, A počáteční koncentrace acetonitrilu v gradientu a B strmost gradientu {(p = A + B.F). Strmost gradientu se vypočítá podle vztahu: B = {cpG-A)IVG,