Genová terapie II 26. 11. 2004 Terapie rakoviny ex vivo * Genetický transfer TNFa do lymfocytů infiltrujících do tumoru (TIL) * Adoptivní imunoterapie genetickou modifikací tumorových buněk -modifikace myších tumorózních buněk inzercí cytokinových genů (TNF-a, IFNg, GM-CSF) nebo HLA genů (HLA-B7) Terapie rakoviny ex vivo * Adoptivní imunoterapie genetickou modifikací fibroblastů (inzerce IL-2 nebo IL-4 pro terapii nádorů prsu, kolorekta, melanomu nebo renálního karcinomu). Modifikované kožní fibroblasty jsou smíchány s ozářenými autologními tumorózními buňkami a podány subkutánně. V ideálním případě dojde k systémové protitumorové imunitní odpovědi organismu. Terapie rakoviny in vivo * Adoptivní imunoterapie přímou injekcí liposomů s genem pro HLA-B7 (melanom, KR tu, solidní tumory) * Retrovirový transfer genu pro "prolék" (prodrug-HSV-tk-thymidin kináza, která zvyšuje senzitivu vůči gancycloviru, tím že zvyšuje jeho fosforylaci. Gancyclovir trifosfát inhibuje DNA polymerázu a způsobuje buněčnou smrt) -- (glioblastoma multiforme) * "Bystander efekt" Genetická terapie k intervenci do životního cyklu HIV-1 * Blokáda infekce- transferem genu pro sCD4 do lymfocytů nebo hematopoetických progenitorů se zvýšenou hladinou cirkulujicích sCD4. Při dostatečné hladině sCD4 se sníží počet infikovaných T-lymocytů * Inhibice na úrovni RNA * 1. antisense/ribozymový přístup * 2. RNA návnada (RNA decoy) -- arteficiální konstrukce krátkých úseků RNA, ketré se nabídnou klíčovým regulačním genetickým produktům HIV (tat a rev) a ty se potom nenavážou na specifické oblasti virové RNA (TAR a RRE). * Inhibice na úrovni proteinu * Intracelulární protilátky * Mutované proteiny (transdominantní proteiny gag) Alain Fischer -- léčba SCID * 2000 / INSERM-Hopital NECKER prohlášení o úspěšné léčbě SCID u 2 chlapců * Dědičný X-SCID, "baby in the bubble" závažná deficience jak celulární tak humorální imunity (T i B lymfocytů) * X-linked SCID je způsoben defekten v jednom z řetězců IL-2R (gen Yc) na pozici Xq13 * Jedinou opravdu lege artis léčbou je dnes transplantace kostní dřeně od histokompatibilního sourozence. Pro většinu postižených však připadá v úvahu alogenní transplantace od nepříbuzného dárce, pětileté přežití je 65%... * Ex vivo trasfer Yc geno do autologních prekurzorů hematopoezy s užitím vektoru odvozeného od MoMuLeu viru Léčba SCID II * v říjnu 2002 dvě ze 14 dětí ve studii onemocněly "leukemia like" syndromem, první závažný nežádoucí efekt genové terapie v tomto případě * Hacein-Bey-Abina et al. -- v buněčných klonech odvozených od pacientů došlo k inzerci vektoru v blízkosti promotoru LMO2 kódujícího transkripční faktor nezbytný pro hematopoezu Léčba SCID III * "V tomto světle se jeví genová inzerce s užítím retrovirových vektorů jako jev příliš náhodný a necílený, aby ho bylo možno použít rutinně v terapii" , David A. Williams * Překvapivě, k takovéto inzerční leukemogenezi bez rozsáhlé virové replikace došlo v jednom případě z několika tisíc v preklinických experimentech. * Nejasné je, proč došlo k inzerci virového vektoru v blízkosti LMO2 promotoru jen u dvou dětí ze 14 léčených stejnou technikou a proč se jednalo o děti ve studii nejmladší Závěr * Genová terapie je v časném stadiu vývoje * Možnost nepředvídatelných vedlejších efektů léčby * Inzerce cizích nebo modifikovaných genů do genetického materiálu individua může porušit jejich funkci nebo způsobit mutace * Imunitní systém organismu může na přítomnost produktů genové terapie reagovat nepředvídatelně * Žádná z forem genové terapie dosud neposkytla jednoznačné výsledky, v současnosti je výzkum ve stadiu sběru nových požadavků Děkuji za pozornost * Vasku.Julie@seznam.cz * Ústav patol fyziol, LF MU