r • 7 ŕ-- Úvod do studia biologi kmenových bunek <** ■í* Somati -ŕ ** km vé buňk ST*' ■r J--S r^ cell niches <9 3ľ =>. z©©*® o(o)Jô) f 0 Undifferentiated stem cell 2 Rawlins 2006 P*. - ŕ** Mf-mmwtlaiÉi sobicí faktory >ry , tsT ^■* ** T Inner cell mass Fertilization Blastocyst Fetus EG cf> m EC j-—. , Embryonal carcinoma Pluripotent stem cells Donovan 2001 rlTRKTSTIWC Embryonální zárodečné buňky (Embryonic germ cells - EG) Embryonální nádorové buňky (Embryonal carcinoma cells - EC) .** ■' lacní p ES buněk odvozených z vnitřní buněčné masy Embryonální tkáně Zárodečný Zárodečný ektoderm Zárodečný mezoderm Primiti vní proužek Zárodečný entoderm Extraembryonál ni Žloutkový vak Extraembryonální tkáně >- Syncytiotrofoblast Gilbert 1997/Bílek 2004 ^^ ^ *^ * Embi -EB) ^jednoduché, více buněčnýc + tolerující genotyp • špatně definované podmínky Fill v*. p) Vmonovrstve + lepe definovne podmínky - malá výtěžnost v s- ■ ■ s- [•lyiwivíli ' - Leukémie inhibujicí faktor - LIF s*>- blokuje spontánni i indukovanou diferenciaci embryonálních pluripotentních, buněk ž>~~- významný regulátor hemopoezy, NEUROGENEZE, kardiogeneze ... člen IL-6 rodiny (IL-6, IL-11, LIF, oncostatín M/OSM, ciliary neurotrophic factor/CNTF, cardiotrophin-l/CT-1, cardiotrophin-like cytokine/CLC pleiotropní působení V Sk >*■- :^> .■>" V- ■r ^_ S—-m -. .. f: * tsT J IL-6 - interleukin-6 IL-11 - interleukin-11 ft±j i íl ftm l íl íl l w IW i CNTF OSM CLC - cardiotrophin-1 - ciliary neurotrophic factor - oncostatin M - cardiotrophin-like cytokine SM-R Signalizující receptory 55 Po navázání ligandu na specifický receptor se tento komplex váže s vysokou afinitou na receptor gp130 a spouští transdukci signálu IL-11 i* LIF-R >*■ ♦^'CT-1 *■ .finitu, tím je zabráněno aktivaci gp130 samotným ligandem! J Komplex ligand / vysoce afinitní receptor / gp130 spouští několik paralelních drah transdukce signálu, hlavní / fyziologicky nejvýznamnější se zdá dráha JAK ^s STAŤ." * -^ ,■ s> "STAŤ - transduktor signálu a aktivátor transkripce (signal transducer and activator of transcription) ______ Heinrich 2003 / Výběr nejvýznamějších oblastí vyžadujících metabolizmus retinolu/vit.A fi B) růst a vývoj organismu ^ ■* Kyselina retinov velmi silný induktor pleiotropní působení ES / EC + EB + RA ■ buňky neurální ■ buňky kosterní svaloviny a ad ■ buňky srdeční a hladké svaloviny . ■ -.... ES / EC + monovrstva + RA ■ buňky primitivního entodermu ■ neurální buňky (motoneurony?) RARort EEIVPS74PP PPPLPR RARß2 EELVPS67PPS70PLPPPR RKRRP RP RKRRPS362KP RARy2 EEMVPS P . PPPPPR RARyl EEMVP: BSf^l PPPPPR RRRRP QP SSSLN ...SS61P.. S96p__S101p LNPS AF-1 (A/B doména) - oblast regulující aktivaci transcnpce, nezávisle na ligandu DBD (C doména) - DNA vázající doména (DNA-binding domain) LBD/AF-2 (D/E doména) - oblast regulující aktivaci transkripce, závislé na ligandu JNK1 + JNK2 Exprese a aktivita myšího embrya (16 dpc* A) In situ hybridizace mRNA RALDhP B + C) RARE aktivita (RARE-LacZ reporter) 7 r- kce buněk exprimujících indukovanou ß-galaktosidazu / ■í* 7 Schematický princip imunodetekc - Účinek séra na RA indukovanou neurální diferenciaci 2 2$ 2 2 í <¥ ^ + + U_ u_ Ol z co co co co co "- A*L>-/Í? H-CAM Cytokeratin Endo-A SF+fiA IS 6 days G A 714 ^f crfefoprvteffí \ HFfíT RE liniově specifických genů neuroektoderm entoderm SF+fiA,' SF ♦ buněčná jádra ♦ cytokeratin EndoA pozitivní buňky - entoderm ♦ N-CAM pozitivní buňky - neurony 5> •* - / * kemie inhibujici fa posiluje RA indukovanou neurální diferenciac ~- buněk linie P19 Proliferace j jtéŽ Apoptóza LIF - - - + + - - + RA.....++ + hours 0 24 48 24 48 24 48 24 + + 48 Lamin B DNA 66kDa 45kDa Grecifické protilátky) etekce fosforylace (posttranslační modifikace) Erk kiná f (specifické protilátky] v>-^ ■^. r^