Komplementfixace
                                          (KFR, téma J08)

                                       Typy metod – opakování

n   Přímé metody: detekce mikroba, jeho části nebo produktu. Mikroskopie, kultivace, biochemická
identifikace, průkaz antigenu. Pozitivita = je jisté, že agens je NYNÍ přítomno.

n   Nepřímé metody: detekce protilátek proti mikrobovi. Pozitivita = mikrob potkal hostitele v
minulosti (nevíme, zda před týdny / měsíci / roky)

                                  Antigen a protilátka – opakování

Antigen = makromolekula pocházející z.cizího organismu: rostliny, mikroba, jiného živočicha. V
mikrobiologii nás zajímají mikrobiální antigeny = části mikrobiálního těla, které vzbuzují
v.hostiteli antigenní odpověď

Protilátka = imunoglobulin, tvořený v.těle hostitele jako odpověď na antigenní výzvu (samozřejmě
nejen u.člověka, ale i u zvířat)

                                  Jak interakci využít – opakování

                                 Interpretace – doplněné opakování

n   Průkaz antigenu je přímá metoda. Pozitivní výsledek znamená přítomnost mikroba v těle pacienta

n   Průkaz protilátek je nepřímá metoda. Jak odhadnout, kdy se mikrob s.tělem pacienta setkal:

  n  Množství protilátek (titr) a zejména změna tohoto množství (dynamika titru)

  n  Třída protilátek: IgM/IgG (více v J10)

  n  (Avidita protilátek)

                                           Dynamika titru

n   Průšvih je, že každý má jinou úroveň protilátkové odpovědi. Proto samotná hodnota titru mnoho
neříká

n   Změna titru vypovídá více. Jde-li o čerstvou záležitost, titr se vždy vyvíjí, nejprve stoupá,
později zvolna klesá.

                                     Proč nestačí samotný titr

n   Někdy se stane, že málo reaktivní pacient má i v akutní fázi titr dosti nízký



                                       Párová a nepárová séra

n   Párová séra = první vzorek je uchováván v ledničce, dokud nepřijde i druhý. Pak jsou oba
hodnoceny naráz. 4násobný vzestup se v tom případě má za signifikantní pro akutní infekci.

n   Séra nejsou párová (druhý vzorek je vyšetřen zvlášť): zvětšuje se riziko náhodné, chyby, proto
zpravidla vyžadujeme 8násobný vzestup titru

                                       Komplementfixace (KFR)

n   Komplement = jedna ze složek imunitní reakce

n   Pro KFR používáme morčecí komplement. Pacientův komplement je před reakcí inaktivován

n   Komplement není schopen vázat se na samotný antigen

n   Komplement není schopen vázat se na samotnou protilátku

n   Komplement je schopen vázat se pouze na KOMPLEX obou

                                            Použití KFR

n   KFR lze použít pro diagnostiku mnoha, zejména virových infekcí

n   Jako i jiné serologické reakce se KFR používá k průkazu antigenu či protilátky

n   Pro zjednodušení uvádíme v tomto praktiku pouze průkaz protilátky

n   Berme to tedy tak, že máme laboratorní antigen, který konfrontujeme se sérem pacienta (kde
hledáme protilátky)

                                  Jak funguje komplement (Úkol 1)

Amboceptor = králičí protilátka proti beraním erytrocytům

n  Beraní ery + amboceptor bez komplementu `a není hemolýza

n  Beraní ery + komplement bez amboceptoru `a není hemolýza

n  Beraní ery + komplement + amboceptor `a hemolýza

n  Králičí ery + komplement + amboceptor `a není hemolýza

                                    Titrace komplementu (Úkol 2)

n   Pro reakci potřebujeme množství morčecího komplementu, které není moc velké ani malé.

n   Proto zjišťujeme, jaké množství komplementu hemolyzuje pracovní jednotku krvinek s.amboceptorem
(hemolytická jednotka)

                                    Titrace komplementu výsledky

n   Ředění morčecího séra (pro nás je zdrojem komplementu):

  n  1 : 32 = hemolýza

  n  1 : 36 = hemolýza

  n  1 : 40 = hemolýza

  n  1 : 44 = není hemolýza

n   Hemolytická jednotka odpovídá 1 : 40

n   Abychom získali dvě jednotky, ředíme sérum 1 : 20

                                     Princip KFR (Úkoly 3 a, b)

                                           Problémy s KFR

n   Příliš mnoho komplementu `a falešná negativita. Co dělat? Titrovat komplement (viz Úkol 2)

n   Některá složka séra sama o sobě vyvazuje komplement (složka antikomplementarity): falešně
pozitivní výsledky. Co dělat? Provést test antikomplementarity bez antigenu

                              Test antikomplementarity (Úkoly 3 c, d)

                                    Úkoly 4: Respirační patogeny

n   Úkol 4: Celá serologická destička patří jednomu pacientovi. Máme šest respiračních patogenů,
každý je ve dvou řádcích (akutní vzorek a rekonvalescentní). První sloupec je test
antikomplementarity, následuje sedm ředění séra – ve druhém sloupci 1 : 5 a pak geometrickou řadou s
koeficientem dva. Kromě virů je ve škále i bakterie Mycoplasma pneumoniae

                                        Úkol 5: Toxoplasmosa

n   Úkol 5: Destička patří pozitivní kontrole a šesti pacientům. Hledáme protilátky proti klíšťové
encefalitidě. V tomto případě nesledujeme dynamiku titru, vypátráme pouze hodnotu titru.

n   V prvním sloupci jsou opět testy antikomplementarity, následuje ředění geometrickou řadou od
ředění 1 : 8



                                   Úkol 6: Klíšťová encefalitida

n   Úkol 5: Opět testujeme protilátky, tentokrát proti klíšťové encefalitidě a tentokrát opět jako
párové.

n   V prvním sloupci jsou opět testy antikomplementarity, následuje ředění geometrickou řadou od
ředění 1 : 8

                                             Hezký den!