Neutralizace (J09)

                                    Sledujte www.medmicro.info!

                                       Typy metod – opakování

n   Přímé metody: detekce mikroba, jeho části nebo produktu. Mikroskopie, kultivace, biochemická
identifikace, průkaz antigenu. Pozitivita = je jisté, že agens je NYNÍ přítomno.

n   Nepřímé metody: detekce protilátek proti mikrobovi. Pozitivita = mikrob potkal hostitele v
minulosti (nevíme, zda před týdny / měsíci / roky)

                                  Antigen a protilátka – opakování

Antigen = makromolekula pocházející z.cizího organismu: rostliny, mikroba, jiného živočicha. V
mikrobiologii nás zajímají mikrobiální antigeny = části mikrobiálního těla, které vzbuzují
v.hostiteli antigenní odpověď

Protilátka = imunoglobulin, tvořený v.těle hostitele jako odpověď na antigenní výzvu (samozřejmě
nejen u.člověka, ale i u zvířat)

                                  Jak interakci využít – opakování

                                      Interpretace – opakování

n   Průkaz antigenu je přímá metoda. Pozitivní výsledek znamená přítomnost mikroba v těle pacienta

n   Průkaz protilátek je nepřímá metoda. Jak odhadnout, kdy se mikrob s.tělem pacienta setkal:

  n  Množství protilátek (titr) a zejména změna tohoto množství (dynamika titru)

  n  Třída protilátek: IgM/IgG (více v J10)

  n  (Avidita protilátek)

                                   Dynamika titru - interpretace
                                         změněné opakování

n   Serokonverze je ideální případ, kdy první („akutní“) vzorek je odebrán ještě před nástupem
protilátkové odpovědi. V.tom případě stačí, když je druhý je pozitivní, bez ohledu na výši titru

n   Změna titru se týká ostatních případů. U párových sér se za signifikantní považuje zpravidla
čtyřnásovná změna (vzestup i pokles titru)

                                  Párová a nepárová séra opakování

n   Párová séra = první vzorek je uchováván v ledničce, dokud nepřijde i druhý. Pak jsou oba
hodnoceny naráz. 4násobný vzestup se v tom případě má za signifikantní pro akutní infekci.

n   Séra nejsou párová (druhý vzorek je vyšetřen zvlášť): zvětšuje se riziko náhodné, chyby, proto
zpravidla vyžadujeme 8násobný vzestup titru

                                Neutralizační reakce: obecný princip

n   Protilátky fungují několika způsoby. Jeden z nich je přímá neutralizace.

n   Tento způsob se zřídka vidí u celých bakterií. Pozorujeme ho u virů nebo bakteriálních toxinů

Nicméně někdy protilátky neutralizují i určitou charakteristiku celé bakterie, např. pohyblivost
Treponema pallidum u tzv. Nelsonova testu (TPIT).

                                      Neutralizace schématicky

n   Protilátka (Ig) brání efektu toxinu/viru na buňku / krvinku

n   Příklad: ASLO (Toxin = streptolyzin O, Ig = antistreptolyzin O, krvinka)

                                  Příklady neutralizačních reakcí

                                        Úkol 1 ASLO: princip

                                            Úkol 1: ASLO

n   Protilátka blokuje hemolytický efekt toxinu (streptolyzinu O) na krvinku.

n   ASLO není nepřímý průkaz, přestože hledáme protilátky. Nepátráme tu po patogenovi, určujeme
samotné protilátky, jež mohou být nebezpečné

n   U ASLO neužíváme geometrickou řadu. Hodnoty ředění jsou na lístečku.

n   Titr nad cca 250 znamená možnost autoimunitní odpovědi

                                     ASLO – praktické poznámky

n   Pozor! Věta o dvou řádcích a počátečním ředění 1 : 40 a 1 : 60 (viz protokol) NEPLATÍ. Ve
skutečnosti má každý pacient jen jeden řádek, hodnoty ředění jsou uvedeny na lístečcích, které máte
na stole.

n   Panel se odečítá naležato. Obsahuje pozitivní kontrolu a sedm pacientů.

                                     Postup ředění séra – ASLO

                                            Úkol 2: HIT

n   Hemaglutinačně Inhibiční Test

n   Pozor, tohle NENÍ aglutinace, je to druh neutralizace!

n   Protilátka neutralizuje virové shlukování krvinek (in vitro vlastnost většiny virů)

n   Úkol: Odečtěte výsledky HIT u klíšťové encefalitidy. Učiňte pravděpodobný závěr (akutní infekce?
Pouze paměťové protilátky? a podobně)

n   V prvním sloupci ředění 1 : 10

                                          Zapamatujte si:

n   HIT není aglutinace, ale neutralizace virového shlukování krvinek

n   HIT se liší od reakce ASLO především tím, že krvinky nejsou hemolyzovány, ale shlukovány. Stejné
je naopak to, že specifická protilátka dokáže přístlušnému efektu zabránit

n   HIT v úkolu 2 je „už zase“ klasický nepřímý průkaz (na rozdíl od ASLO)

                               Úkol 3: VNT (nepleťte si to s TNT J )

n   Virus Neutralizační Test

n   Buněčná kultura bývá poškozena virem. Škodu můžeme pozorovat jako změnu barvy v důlku (pH se
mění)

n   Jsou-li přítomny protilátky, mohou tomuto vlivu na buňky zabránit

n   V prvním sloupci je ředění 1 : 10

n   V posledním sloupci jsou kontroly

                                             Hezký den!