Klinická virologie II (J13)

                                           Pro zopakování

n   Cílem mikrobiologických metod je zpravidla detekce patogena, popř. určení jeho citlivosti na
antimikrobiální látky (ale u virů zatím většinou ne)

n   Patogena určujeme

  n  Přímými metodami

    n  detekce celého mikroba (jako morfologické či fyziologické jednotky)

    n  detekce jeho části (antigenu, DNA)

    n  detekce jeho produktu (například toxinu)

  n  Nepřímými metodami: detekce protilátek

                                 Přehled metod – a které využijeme:

n   Přímé metody (práce se vzorkem či kmenem)

  n  Mikroskopie (nativní preparát, barvení…)

  n  Kultivace (na tekutých i pevných půdách)

  n  Biochemické a podobné identifikační metody

  n  Průkaz antigenu (pomocí protilátky)

  n  Pokus na zvířeti (izolace, průkaz toxicity)

  n  Průkaz nukleové kyseliny

n   Nepřímé metody

  n  Průkaz protilátek (pomocí antigenu)

                                         Přímý průkaz virů

n   Kultivace `a izolace (virus se často nepomnoží, jen uchová živý). Vyžaduje živé buňky. Blíže viz
J 12

n   Mikroskopie: elektronoptická, optická jen k průkazu něčeho, co viry dělají in vivo či in vitro
(inkluze, cytopatický efekt)

n   Biochemická identifikace nepadá v úvahu

n   Pokus na zvířeti zde splývá s izolací viru

n   Průkaz DNA – u virů > u bakterií

n   Průkaz AG ve vzorku – velmi běžný

                                        Nepřímý průkaz virů

n   Používá se hlavně KFR, různé typy neutralizací (HIT, VNT) a v poslední době především reakce se
značenými složkami (hlavně ELISA)

n   Pozor! Ne vše, kde se jako vzorek použije sérum, je nepřímý průkaz! U systémových viróz je často
agens (nebo jen jeho antigen) v séru přítomno, a pak se dá sérum použít i pro přímý průkaz

                                       Hepatitidy a virus HIV

n   Existuje pět hlavních typů virových hepatitid VHA až VHE, které způsobují viry HAV až HEV. Každý
patří do jiné skupiny, většina jsou RNA viry, ale virus hepatitidy B je DNA virus

n   VHA a VHE (pomůcka: samohlásky) se přenášejí fekálně orální cestou (ruce)

n   VHB, VHC a VHD – přenos krví, popř. sexuální (u VHC spíše nevýznamný)

n   Virus HIV způsobuje AIDS a dvě jeho před-stádia (PGL, ARC)

                                      Úkol 1 – diagnostika HAV

n   V úkolu 1a) stanovujeme anti-HAV IgM. Výpočet cut off: průměr C1 a D1

n   V úkolu 1b) stanovujeme celkové protilátky anti-HAV

n   Výpočet cut off (1a + b): průměr C1 a D1. Pozitivní je to, co je vyšší, než cut off + 10 %,
negativní je to, co je nižší než cut off – 10 %, to mezi tím je hraniční

Stanovení IgM + celkových protilátek je alternativou ke stanovení IgM a IgG

                                               HAV J

                                      Úkol 2: Diagnostika HBV

n   HBV má tři pro diagnostiku významné antigeny. Jen dva z nich však nalézáme v séru: HBsAg (toho
je hodně, protože se tvoří v nadbytku) a HBeAg.

n   Protilátky naopak můžeme stanovovat proti všem třem z nich: anti-HBs, anti-HBe i anti-HBc.

n    Diagnostiku případně doplní PCR, průkaz jaterních enzymů aj.

n   Z kombinace vyšetření plyne interpretace

                                         Virus hepatitidy B

                                    Stanovení markerů hepatitid

n   2a) Stanovení HBsAg a HBeAg

n   2b) Stanovení anti-HBs a anti-HBe

n   Výpočet cut off (úkol 2a i úkol 2b): průměr C1 a D1. Pozitivní je to, co je vyšší, než cut off +
10 %, negativní je to, co je nižší než cut off – 10 %, to mezi tím je hraniční

                                      Úkol 3: Diagnostika HCV

n   3a): PCR, elektroforéza

n   3b): anti-HCV

n   Výpočet cut off: průměr negativních kontrol (důlku B1, C1 a D1) + 0,050

n   Pozitivní je to, co je vyšší, než cut off + 10 %, negativní je to, co je nižší než cut off – 10
%, to mezi tím je nutno retestovat z nového odběru

                                      Úkol 4: Diagnostika HIV

n   ELISA protilátky – anti HIV

n   Výpočet cut off (1a + b): průměr C1 a D1. Pozitivní je to, co je vyšší, než cut off + 10 %,
negativní je to, co je nižší než cut off – 10 %, to mezi tím je hraniční

                                             Hezký den!